食品（婴幼儿食品）中维生素A检测方案(液相色谱仪)

应用简讯 Agilent食品检测与农业Trusted Answers 采用在线 SPE-中心切割液相色谱法对食品中的维生素A、D、E进行测定 作者 前言 陈刚，杨新磊，周洁，李浪 安捷伦科技(中国)有限公司 有关食品中维生素A、D、E分析的新国家标准方法从2017年6月23日起实施，覆盖了婴幼儿食品、乳品、肉与肉制品、食用植物油、坚果、豆类和辣椒粉等多种食品基质。但是该标准方法中规定的样品前处理过程极其复杂、测定方法多样(同一成分有不同的检测方法)、检测周期长、目标化合物回收率低且重复性差，极大降低了分析效率。为解决该国标方法所存在的难点和不足，需要开发一种同时测定维生素 A、D、E的稳定高效的二维液相色谱方法。 本方法参照现有的文献方法2.4，基于二维液相色谱并串联在线固相萃取(online SPE) 技术，成功建立了食品中维生素A(V)、维生素 D (V)及三种维生素E (Ve)异构体的中心切割快速分析方法。此方法将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过程。第一维液相色谱对Ⅴ和V进行分析，同时对V，进行初步净化；第二维液相色谱对V，进一步分离，整个分析过程只需一次进样，即可完成样品中V、V，和Ve的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回收率不稳定现象。实验结果准确、重现性好，表明该方法可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。 以、V、V分析 V、V、V分析方法包含四个阶段：第一阶段为进样/SPE净化，此时阀1的位置为1-6，阀2的位置为1-6；第二阶段为 SPE 洗脱/检测VA，此时阀1(左阀)的位置为1-2，阀2(右阀)的位置为1-6；第三阶段为捕获Vp， 第二维检测Vp，此时阀1的位置为1-6，阀2的位置为1-2；在第四阶段，第一维液夜色谱继续检测VE， 第二维液相色谱检测Vp，此时阀1的位置为1-6，阀2的位置为1-6。四个阶段阀切换示意图见图1。 图 1.在线 SPE-二维液相法分析V、V与三种Ve的阀切换示意图 表1.仪器配置与方法设置 SPE泵 第一维 第二维 仪器 配置 Agilent 1260 Infinity Ⅱ四元泵，部件号 G7111B Agilent 1260 InfinityI自自动进样器，部件 号 G7129A Agilent 1260 Infinity Ⅱ四元泵，部件号 G7111B Agilent 1260 Infinityll柱温箱，部件号 G7116A，内置2位6通阀 Agilent 1260 Infinity Ⅱ紫外检测器，部件 号 G7114B Agilent 1260 Infinity Ⅱ二元泵，部件号 G7112B Agilent 1260 Infinity lI 二极管阵列检测器， 部件号7117C， 配备 60 mm 超高灵敏度流 通池 流动相 A：乙醇：水=4：6； B：乙腈：异丙醇=1：1 A：水；B：乙腈 A：乙腈；B：甲醇 梯度 时间(min) B% 4.0 0.0 00 4.1 100 11. 100 时间 (min) B% 0.0 50 2.0 806.0 16.0 19.0 80100100 50 时间(min)B% 0.0 1005.0 1005.1 10 20.0 20.1 22.0 10100100 11.1 0 流速 22.0 0 0-11min： 1 mL/min 11.1-20 min： 0.2 mL/min 20.1-22 min： 1 mL/min 19.1 22.0 50 1.5 mL/min 0.4 mL/min 分析柱 PLRP-S 4.6×12.5 mm， 15-20 pm Poroshell 120 EC-C8，4.6×100 mm， 4 pm Zorbax Eclipse Plus PAH， 2.1×100mm， 3.5 pm 捕获柱 Poroshell 120 EC-C18， 4.6×5 mm， 4 pm 进样量 100pL 柱温 35°C 检测 波长 0-10 min： 325nm； 10-13 min： 264 nm； 13-22 min： 294 nm 采集频率： 20Hz 264nm 采集频率： 2.5Hz 阀位置 阀1：0-4min(位置1-6)；4-6min(位置1-2)； 6-22 min (位置1-6) 阀2：0-12.1 min (位置1-6)；12.1-12.6 min (位置1-2)； 12.6-22.0 min (位置1-6) 阀2具体阀切换时间以实验中VD出峰时间为准 图2.V/Ve和V标准品色谱图 图3.V/V和V奶粉样品色谱图 图2所示的标准品色谱图表明：在第一维色谱柱上，VA、Ve异构体以及杂质得到了良好分离；在第二维色谱柱上，两种V，与杂质得到了良好分离，同时V，检测灵敏度良好。图3所示的奶粉样品色谱图表明：样品中V检测灵敏度良好，同时样品中杂质产生的干扰较小。 对标准品的线性范围进行考察，结果发现VA、V和Ve分别在0.006-1.2 ug/mL、1-200 ng/mL 和 0.06-12 pg/mL 的浓度范围内表现出良好的线性关系，线性系数均大于0.9995。 连续6次标准品进样，对方法重现性进行考察，结果如图4所示。从中可以看出，所有目标分析物的峰面积与保留时间相对标准偏差 (RSD) 均小于0.5%，表明该方法具有良好的重现性。 图4.V/Ve和V标准品连续进样6次色谱图 实验结果表明，新的维生素检测方法具有以下优势： -样品分析通量大幅提高。皂化液直接进样方法与国标方法相比，样品前处理时间由原来的2-3小时缩短为30分钟左右，分析通量提高5倍以上 -省去了前处理提取步骤，溶剂使用量大大减少，降低了实验成本，也避免有机试剂对实验人员造成危害。阀切换方法代替繁琐的净化、浓缩等过程，自动化程度大幅提高 -按照国标方法的检测低限浓度，考察方法的灵敏度，分析图谱表明所有物质在最低限均有良好响应 ( 参考文 献 ) ( 1. GB 5009.82-2016.食品安全国家标准食品中维生素A、D、E 的测定 ) 2. Lang Li， Zhanlei Xing. Online SPE method on determinationof vitamin A， D， E in milk powder simultaneously. 2nd DalianInternational Symposium and Exhibition on Chromatographyand Related Techniques. 2011： 444 ( 3.杨新磊，余彦海，李浪，肖尧.中心切割法快速分析婴幼儿配方奶粉中的维生素A、维生素E及微量维生素 D. 5991-5194CHCN ) ( 4.周洁，李浪，杨新磊，余彦海，肖尧.采用中心切割法快速分析食品中的维生素A、四种维生素E 异构体及微量维生素 D. 5991-9381ZHCN ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线： 800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 ( ◎安捷伦科技(中国)有限公司，2019 ) 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。·Agilent， 中国出版HCNTrusted Answers 本方法参照现有的文献方法，基于二维液相色谱并串联在线固相萃取 (online SPE) 技术，成功建立了食品中维生素 A (VA)、维生素 D (VD) 及三种维生素 E (VE) 异构体的中心切割快速分析方法。此方法将前处理皂化液直接进样，省去了液液萃取等复杂的前处理过程。第一维液相色谱对 VA 和 VE 进行分析，同时对 VD 进行初步净化；第二维液相色谱对 VD 进一步分离，整个分析过程只需一次进样，即可完成样品中 VA、VD 和 VE 的测定。该方法不仅可以节省大量的样品前处理时间，同时可以避免复杂的样品前处理过程导致的回收率不稳定现象。实验结果准确、重现性好，表明该方法可以用于多种食品基质中脂溶性维生素的常规快速检测。