动物源性食品中恩诺沙星残留检测方案(液质联用仪)

结论版权所有 ◎2016， PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。PerkinElmer° 是PerkinElmer， Inc. 的注册商标。其它所有商标均为其各自持有者或所有者的财产。151112_CHN_01 背景 喹诺酮类 (Quinolones，QNs)是人工合成的一类抗菌药物，因其具有抗菌谱广、高 效、低毒、组织穿透力强、价格低廉等特点，已成为食品动物饲养和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，但由于细菌对喹诺酮类药物耐药性的产生和某些喹诺酮类药物的潜在致癌作用，其残留问题已引起广泛关注。 2003年我国的鳗鱼产品就曾因氟喹诺酮类药物残留问题出口日本受受。目前，包括我国在内的许多国家和地区都对喹诺酮类药物的使用范围和最大残留限量做出规定。欧盟规定动物肌肉等组织中恩诺沙星等的 MRLs 为 0.01~1.9 mg/kg；美国禁止在水产养殖业中使用QNs；日本对进口生鳗鱼及其制品的环丙沙星等残留限量控制在检测限的0.05 mg/kg。中华人民共和国农业部公告第2292号，自2016年12月31日起，停止经营、使用用于食品动物的洛美沙星、培氟沙星、氧氟沙星、诺氟沙星4种原料药的各种盐、酯及其各种制剂。本文根据《GB/T20366-2006动物源产品中喹诺酮类量留量的测定液相色谱-串联质谱法》，采用PerkinElmer QSightTM LCMSMS 建立动物源食品中喹诺酮类药物残留的解决方案。 称取5.0g试样，置于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入20 mL甲酸-乙腈溶液(1：49)，均质1 min，以4000 r/min 离心5 min。上清液移入另一个50 mL聚四氟乙烯离心管中。将离心残渣用20mL甲酸-乙腈溶液再提取一次，合并上清液。 净化 将上清液转移至125mL分液漏斗中，加入25 mL乙腈饱和的正己烷，振摇2 min， 将下层溶液转移至100 mL棕色鸡心瓶中，于40℃水浴中旋蒸至近干，氮吹至干。准确加入1.0mL甲酸-乙腈溶液溶解残渣，涡流混匀后，过滤至样品瓶中，供LC-MS/MS 测定。 液相色谱参数 色谱柱： Brownlee SPP C18， 100 mm*2.1 mm， 2.7um(货号：N9308404) 柱温：35℃ 流动相：A：乙腈，B：水(含0.1%甲酸，2.0mM乙酸铵) 流速：0.4mL/min 运行时间：10min 梯度洗脱：洗脱程序见表1： 表1.液相梯度洗脱条件 Time/min A/% 0.00 5 95 0.50 5 95 1.50 15 85 4.00 20 80 7.00 90 10 8.00 90 10 8.01 5 95 10.00 5 95 质谱参数 以下参数以 PerkinElmer QSight 200系列为例，喹诺酮类化合物质谱参数见表2。 表2.化合物质谱参数 备注：*为定量离子对 离子源质谱参数： 离子源模式：：电喷雾离子源，正离子模式(ESI+) 反吹气：：75 雾化气：220 离子源温度：450℃ 离子源喷雾电压：5000V 实验结果 各组分的色谱图如图1所示，各个化合物均获得良好的色谱分离。 图1.化合物的提取离子色谱图 备注：1.诺氟沙星；2.培氟沙星；3.环丙沙星；4.氧氟沙星；5.依诺沙星；6.氟罗沙星；7.恩诺沙星；8.洛美沙星；9.达氟沙星；10.奥比沙星； 11.沙拉沙星；12.双氟沙星；13.司帕沙星；14.萘啶酸；15.氟甲喹；16.恶喹酸 十六种喹诺酮类化合物的标准曲线线性见表3，氟甲喹标准工作曲线的浓度梯度为：0.001，0.002，0.005，0.1，0.2，0.5，1，2，5，10 ng/mL。图2为氟甲喹的标准曲线图。 图2.喹诺酮类药物的标准曲线示例，以氟甲喹为例，线性范围为0.001-10 ng/mL 其余喹诺酮目标化合物的标准曲线在0.01-50 ng/mL，依次为0.01，0.02，0.05，0.1，0.2，0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，20.0， 50.0 ng/mL。其中，诺氟沙星和环丙沙星为 0.05-50 ng/mL，萘啶酸和氟甲喹为0.001-10 ng/mL。标准曲线范围内具有良好的线性(R> 0.994))；采用鱼肉基质作为加标样品，平行6个样品测试方法的回收率和方法重现性，详细结果请见表4。从表4可以看到，在加标浓度为2 ng/mL下，回收率为92.25-105.87%，方法重现性为1.53-4.78%。最低定量限为 0.0002-0.01 ug/kg，完全符合残留检测要求。 表3.各个化合物的标准曲线及LOQ 序 号 化合物 线性范围 (ng/mL) 线性方程 相关系数 R² LOQ (ug/kg) 1 依诺沙星 0.01-50 y=42.64422x+5866.8 0.9961 0.002 2 诺氟沙星 0.05-50 v=1.26386x+406.41 0.9960 0.01 3 氧氟沙星 0.01-50 v=21.03723x+1661.1 0.9966 0.002 4 氟罗沙星 0.01-50 v=21.12980x+1348.1 0.9958 0.002 5 培氟沙星 0.01-50 y=19.14638x+1573.3 0.9969 0.002 6 环丙沙星 0.05-50 y=2.1563x +258.33 0.9971 0.01 7 洛美沙星 0.01-50 v=13.99362x+549.16 0.9982 0.002 8 达氟沙星 0.01-50 v=69.63919x+6258.8 0.9979 0.002 9 恩诺沙星 0.01-50 v=24.19528x+1362.3 0.9983 0.002 10 奥比沙星 0.01-50 y=65.65527x+2265.1 0.9950 0.002 11 沙拉沙星 0.01-50 v=10.07551x+126.64 0.9943 0.002 12 司帕沙星 0.01-50 v=40.5440x+1973.2 0.9952 0.002 13 双氟沙星 0.01-50 v=20.43468x+301.13 0.9962 0.002 14 恶喹酸 0.01-50 y=98.76345x+865.33 0.9950 0.002 15 萘啶酸 0.001-10 v=860.93x +860.90 0.9967 0.0002 16 氟甲喹 0.001-10 v=773.94x+850.45 0.9983 0.0002 表4.鱼肉基质加标的回收率和方法重现性数据(n=6) 化合物 鱼肉基质加标 (加标浓度点： 0.4 ug/kg) 化合物 鱼肉基质加标 (加标浓度点： 0.4 ug/kg) 回收率/% 重现性/ RSD% 回收率/% 重现性/ RSD% 依诺沙星 99.06 3.90 恩诺沙星 96.00 4.61 诺氟沙星 95.12 3.96 奥比沙星 100.09 3.27 氧氟沙星 97.12 4.39 沙拉沙星 105.87 3.05 氟罗沙星 102.40 2.73 司帕沙星 92.25 2.39 培氟沙星 94.67 4.65 双氟沙星 105.10 1.53 环丙沙星 93.30 4.78 恶喹酸 95.50 3.71 洛美沙星 95.50 2.71 萘啶酸 98.36 2.98 达氟沙星 94.32 4.63 氟甲喹 97.25 2.09 本方法完全满足对 GB/T 20366-2006动物源产品中喹诺酮类残留量的检测要求(标准里的最低限量为1.0ug/kg)，适用于喹诺酮及其类似物的日常检测。PerkinElmer QSight 210TM 系统完全满足动物源产品中喹诺酮类残留量的日常检测工作。该质谱系统离子源具有自清洁功能以及质谱接口 HSID 热源去溶剂技术，提高仪器抗污染能力，从而获得更低的噪音，更低的检测限，从容应对复杂基质的食品安全检测。 ( 参考文献 ) ( 1. GB/T 20366-2006动物源产品中喹诺酮类残留量的测定液相色谱-串联质谱法 ) ( PerkinElmer SPP系柱色谱柱订购信 息 ：色谱柱采购直线： 021-60645658.021-60645659 ) ( 电子邮件： consumable.china@perkinelmer.com。 ) 标准品订购信息：16种喹诺酮类混标溶液，.1100ppm，货号1ST9243-100M。由天津阿尔塔科技有限公司提供。采购电话022-65378550，电子邮件： Sales@altascientific.com， QQ：2850791070/2850791074 珀金埃尔默企业管理(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区张衡路1670号 邮编：201203 电话：021-60645888 传真：021-60645999 www.perkinelmer.com.cn ( 要获取全球办事处的完整列表，请访问http：//www.perkinelmer.com.cn/AboutUs/ContactUs/ContactUs ) 喹诺酮类（Quinolones, QNs）是人工合成的一类抗菌药物，因其具有抗菌谱广、高效、低毒、组织穿透力强、价格低廉等特点，已成为食品动物饲养和水产养殖中最重要的抗感染药物之一，但由于细菌对喹诺酮类药物耐药性的产生和某些喹诺酮类药物的潜在致癌作用，其残留问题已引起广泛关注。本文根据《GB/T20366-2006 动物源产品中喹诺酮类残留量的测定 液相色谱 - 串联质谱法》，采用PerkinElmer QSightTM LCMSMS 建立动物源食品中喹诺酮类药物残留的解决方案。