溶液中海洋生物毒素检测方案(液相色谱仪)

The world leader in serving science The world leader in serving science ThermoFisher SCIENTIFIC 赛默飞世尔科技色谱与质谱事业部样品分析报告： 2019-APP-LC-090-大连海洋环境监测中心生物毒素测试报告 HPLC-CAD 样品名称/基体 海洋生物毒素/溶液 检测项目 CAD 反梯度测试样品中海洋生物毒素 仪器型号与配置 Vanquish 系列 泵： Dual PumpF (S/N： 8306752) 自动进样器： Split Sampler FT (S/N： 1004811) 柱温箱： Column Compartment H (S/N： 6300969) 检测器： Vanquish CAD H(S/N：8302553) 色谱软件： Chromeleon Chromatography Data System7.2.9 色谱柱 X-Bridge C18 (3.0×150 mm，3.5 um) 检测器参数 Vanquish CAD H (5 Hz， filter 3.6 s， 50 ℃) 色谱条件 流动相A：0.05%氨水溶液(pH11) 流动相B：乙：0.05%氨水溶液(90：10，v/v)溶液 流动相梯度： 1~10min，10%B线性变化至90%B； 10~13min，保持90%B，13~15min线性变化至10%B， 平衡 5min。 流速：0.4mL/min 柱温：40℃ 进样量：10 uL 样品个数 4 化合物个数 4 送样时间 2019/06/17 测样起止时间 2019/06/18-2019/06/19 用工时间(天数) 2 分析人 秦旭阳 审核人 刘晓达 背景信息 客户希望采用 CAD 反梯度模式测试溶液中的海洋生物毒素，用来对比自己MS的结果。第一次测试时仅寄送了样品，而本实验的色谱条件比较特殊，由于实验室无客户常用品牌的色谱柱 X-Bridge C18(pH范围2~13，碳载量18%)。 pH11的流动相条件下目前仅Thermo Accucore C18(pH范围1~11，碳载量9%)可尝试。由于 Accucore 色谱柱碳载量远低于客户的色谱柱，故各个峰的保留分离能力不高，但实验结果依然可以看出反梯度模式与常规梯度洗脱下的图谱差异，如基线平稳，分离效果，峰响应等。(图1)。 图1应用反梯度(黑色)与常规梯度(蓝色)对比图与局部放大 客户想要了解更多的信息，因此申请第二次测试并寄送色谱柱及海洋生物毒素标准品来测定。具体内容如下： 二、 样品信息与溶液配制 样品信息 1. Okadaic acid (大田软海绵酸，8.468ug/mL) 2.Yessotoxin (虾夷扇贝毒素， 4.936pg/mL) 3.Dinophysistoxins-1(鳍藻毒素-1，8.55pg/mL) 4，样品溶液 溶液配制 取上述溶液适量，直接进样。 三、实验结果与讨论 由于管线，混合器以及色谱柱变化，反梯度参数需要重新设置，其中左泵设置为分析泵；右泵设置为反梯度补偿泵。Inverse gradient offset为左泵与右泵到达检测器之间的 The world leader in serving science GDV差值(图2)，反梯度洗脱表参数可通过变色龙软件自动转化完成(图3)。 图2 Vanquish duo 反梯度参数配置 图3 反梯度梯度洗脱表 各单标结果见图4，，该色谱条件下各单标均能有效分离且相互无干扰。 图4各单标溶液叠加色谱图 通过保留时间对比，可得知样品溶液中2号峰为虾夷扇贝毒素(图5)。 图5样品溶液与单标溶液叠加图 除鉴定出的虾夷扇贝毒素之外，样品溶液还能检测到其他3个峰。其中保留时间约 The world leader in serving science 8.8min 的响应较高(图6)。 图6样品溶液色谱图 四、 结论与建议 1.反梯度应用 vanquish duo 系统可通过 CAD 检测器为所有检测分析物提供一致的响应。 vanquish duo 系统通过使用第二个泵对检测器输送反向梯度，可始终保持相同的溶剂组成进入检测器即使缺乏特定化合物的单个标准品，也能够可靠的提供一致的定量响应信息。 ：2..本次实验使用了客户常用品牌的色谱柱 X-Bridge C18，其结果相对于第一次实验得到了有效的改善。 3.样品溶液可以检出虾夷扇贝毒素，同时还有其他3个未知峰。样品中虾夷扇贝毒素的浓度可通过单标溶液粗略计算，其结果约为 1.4665ug/mL。由于样品溶液已用完，无法进一步实验。 ThermoFisher SCIENTIFIC The world leader in serving science 4.由于 CAD 检测器的特性(对不挥发或半军发的物质均有响应)，样品溶液中3个未知峰鉴定还需继续研究。 技科尔世飞 客户希望采用CAD 反梯度模式测试溶液中的海洋生物毒素，用来对比自己MS 的结果。第一次测试时仅寄送了样品，而本实验的色谱条件比较特殊，由于实验室无客户常用品牌的色谱柱X-Bridge C18（pH 范围2~13，碳载量18%）。pH 11 的流动相条件下目前仅Thermo Accucore C18（pH 范围1~11，碳载量9%）可尝试。由于Accucore 色谱柱碳载量远低于客户的色谱柱，故各个峰的保留分离能力不高，但实验结果依然可以看出反梯度模式与常规梯度洗脱下的图谱差异，如基线平稳，分离效果，峰响应等。