饲料中氯霉素负化学源检测方案(气质联用仪)

2 结论ThermoFisherSCIENTIFIC 李景林 余天 梁立娜赛默飞世尔科技(中国)有限公司 引言 氯霉素(((Chloramphenicol， CAP)是一种广泛使用的广谱类抗生素，由于它对人体具有严重的毒副作用"，医学界至今还没有确定氯霉素的人体安全接触剂量。美国和欧盟都禁止在食用性动物和动物饲料中使用氯霉素，在法规中CAP的残留量为不得检出。 气质联用仪的负化学源对于具有强电子亲和力的化合物有较高的灵敏度，而本实验采用 Thermo Scientific ISQ质谱仪，具有真空锁定功能。可以在不泄真空的情况下，随意切换 El源和 NCI源。因此，在分析饲料中的氯霉素时，简单、方便，使得 NCI 源的气质联用分析得到更广泛的应用。 实验材料 仪器与试剂 Trace1310气相色谱仪，配备了 SSL(分流/不分流进样口)；ISQ质谱仪 自动进样器： Triplus RSH 三合一自动进样器 色谱工作站：Xcalibur 氯霉素标准品(99.5%)；衍生化试剂：三氟双(三甲基硅烷基)乙酰胺 (BSTFA)+三甲基氯硅烷(TMCS) (99：1，美国 SUPELCO 公司)C18固相萃取柱(美国SUPELCO公司)，填料300mg；乙酸乙酯，正己烷，甲醇，乙腈均为色谱纯，氯化钠为分析纯。 样品：购自山东猪饲料 实验方法 1.标准溶液配制 电子天平准确确取10.0mg氯霉素标准品，色谱纯甲醇溶解定容到100ml， 充分摇匀，配制成 100ug/ml的标准溶液储备液，置于4℃冰箱中保存。制作工作曲线时，再取此储备液用甲醇配制成其他浓度的标准溶液。 2.样品预处理方法： 2.1提取 称取饲料5.00g左右，置于50ml塑料离心管内，加入40ml乙酸乙酯，盖好密封盖于涡旋混合器上混合2min，超声提取 20min。离心机上4000r/min离心分离4min， 取上清液20.0ml，用氮气吹至近干，待净化。 2.2液液萃取净化 称取4.0g氯化钠加水溶解定容到100ml，配制4%的氯化 钠溶液。取 20ml甲醇加4%的氯化钠溶液80ml，配制成氯化钠甲醇溶液。用氯化钠甲醇溶液2ml分三次溶解残渣，均转移到一个15ml的具塞离心管中，加4ml正己烷，涡旋混合2min。然后 4000r/min 离心 4min，吸取上层正己烷弃去，重复上述操作一次。水相加乙酸乙酯3ml， 混合2min， 4000r/min 离心4min，吸取上层乙酸乙酯，同样的步骤重复两次。然后氮气吹干，用3ml5%的乙腈-水溶解，待柱净化。 3.测定 3.1 色谱条件 表1.典型仪器分析条件 2.3固相萃取柱净化 准备好 Cig小柱，顺序用 5ml甲醇，5ml三氯甲烷，5ml甲醇和5ml水活化C：柱。将处理好的样品转移到柱上，用5ml水淋洗，然后用6ml乙腈洗脱，收集在离心管中，用氮气吹干，待衍生化。 2.4衍生化 向干的残留物中加入100ul衍生化试剂，盖塞并涡旋混合10s。在65℃的水浴中反应60min， 然后用氮气吹除多余的试剂。加入 0.25ml正己烷，涡旋混合10s，供色谱分析使用。标准溶液，吹干后，采用同样的衍生化方法处理。 检测器 MS-NCJp 色谱柱： TG-5 ms 色谱柱长 30 m 色谱柱内径 0.25 mm 色谱柱膜厚 0.25 pm 温度： 进样口 250℃ ISQ传输线 200℃ 离子源温度 200℃ 柱温 100℃ (1min) -30 ℃ /min-280℃(9 min) 载气： 氦气 流速 恒流 1.5 ml/min 进样方式 无分流进样 分流时间 1 min 分流比： 20：1 进样量 1.0pL 扫描方式 NCI-SIM 反应气种类 甲烷 反应气流速 1.5 ml/min 选择离子 3 min： 376，466，468 分析结果与谱图 1.不同离子源不同模式下 GC/MS 对氯霉素分析结果 分别使用El源和NCI源，对标准品衍生物(1mg/L)在Fullscan 模式下进行测定，其保留时间一致(图1，图2)，其质谱图如图3，图4所示。 2.工作曲线、回收率和精密度 配置浓度分别为200，100，50，20，10，5，1ug/L的标准样品，衍生化后，用 NCI 在 SIM 模式下检测，得到的线性、检出限结果如表2所示 称取饲料样品，分别添加2个水平浓度的标准品，每个浓度水平平行测定5次。结果表明，平均回收率为80-85%，相对标准偏差(RSD，n=5)为1.4-5%。回收率和精密度数据结果见表3 图1.氯霉素 El Fullscan (m/z 225) 色谱图 3.实际样品 称取5.0g购得的猪饲料中，平行检测两次，未检出氯霉素残留。 NL：2.72E6TIC MSSTD-10 图2.氯霉素 NCI Fullscan (m/z 466)色谱图 STD-10 #3015 RT： 8.23 AV：1 SB： 84 8.14-8.21，8.25-8.32 NL：3.04E6 图3.氯霉素 El Fullscan 质谱图 图4.氯霉素 NCI Fullscan 质谱图 表2.方法线性关系、检出限、定量限 化合物 保留时间 min 定量离子 线性范围 mg/L 相关系数 r2 检出限pg/L 定量限pg/L 氯霉素 8.22 466 0.001-0.2 0.9954 1.0 2.0 表3.方法回收率和精密度数据 化合物 添加水平(0.010mg/L) 添加水平(0.020mg/L) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD (%) 氯霉素 80.0 3.2 85.0 1.4 Thermo Scientific 的 ISQ 质谱仪具有不泄真空更换离子源的功能。在本试验中，，可以在 2min 内将El源和CI源进行切换，不需要卸真空等过程，节省了分析时间。配合Thermo Triplus RSH 三合一的自动化平台，在分析氯霉素质量浓度为 5-200ug/L时，线性良好，重现性。 ( 参考文献 ) ( [1]蒋定国，杨大进，动物性食品中氯霉素残留检测技术的研究概况[J].中国食品卫生杂志：2002，14(2)： 44-47： ) ( [2]徐继林，严小军，徐年军，冯凯，对虾中残留氯霉素 的化学源 GC/MS 分析[J].中国水产科学：2004，11(2)： 111： ) ( [3] GB/T 8381.9-2005饲料中氯霉素的测定气相色谱法：2-3 ) 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) 氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种广泛使用的广谱类抗生素，由于它对人体具有严重的毒副作用，医学界至今还没有确定氯霉素的人体安全接触剂量。美国和欧盟都禁止在食用性动物和动物饲料中使用氯霉素，在法规中CAP 的残留量为不得检出。气质联用仪的负化学源对于具有强电子亲和力的化合物有较高的灵敏度，而本实验采用Thermo Scientific ISQ 质谱仪，具有真空锁定功能。可以在不泄真空的情况下，随意切换EI 源和NCI 源。因此，在分析饲料中的氯霉素时，简单、方便，使得NCI 源的气质联用分析得到更广泛的应用。