饲料中氯霉素检测方案(气相色谱仪)

饲料中的氯霉素的测定-气相色谱法 李景林余翀天梁立娜 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：气相色谱；电子捕获检测器；氯霉素； Keywords： Gas chromatography (GC) ；ECD； Chloramphenicol 引言 氯霉素(Chloramphenicol， CAP)是一种广泛使用的广谱类抗生素，由于它对人体具有严重的毒副作用1，医学界至今还没有确定氯霉素的人体安全接触剂量。美国和欧盟都禁止在食用性动物和动物饲料中使用氯霉素‘2，在法规中 CAP 的残留量为不得检出。 气相色谱的 ECD 检测器对于具有强电子亲和力的化合物有较高的灵敏度，而本实验采用 Thermo Scientific Trace1310 气相色谱，在分析饲料中的氯霉素时，简单、方便，重现性好。 实验材料 仪器与试剂 Trace 1310气相色谱仪，配备了 SSL (分流/不分流进样口)， ECD(电子捕获检测器)； 自动进样器：AS 1310 色谱工作站： Chromeleon 7.2 氯霉素标准品(99.5%)；衍生化试剂：三氟双(三甲基硅烷基)乙酰胺 (BSTFA)+三年基氯硅烷(TMCS)(99：1， 美国 SUPELCO 公司)Ci8固相萃取柱(美国SUPELCO公司)，填料300mg；乙酸乙酯，正己烷，日甲醇，乙腈均为色谱纯，氯化钠为分析纯。 样品：购自山东猪饲料 实验方法 1.标准溶液配制 电子天平准确称取 10.0mg氯霉素标准品，色谱纯甲醇溶解定容到100ml，充分摇匀，配制成100ug/ml的标准溶液储备液，置于4℃冰箱中保存。制作工作曲线时，再取此储备液用甲醇配制成其他浓度的标准溶液。 2.样品预处理方法： 2.1提取 称取饲料5.00g左右，置于50ml塑料离心管内，加入40ml乙酸乙酯，盖好密封盖于涡旋混合器上混合 2min， 超声提取 20min。离心机上4000r/min 离心分离 4min，取上清液20.0ml，用氮气吹至近干，待净化。 2.2液液萃取净化 称取4.0g氯化钠加水溶解定容到100ml，配制4%的氯化钠溶液。取20ml甲醇加4%的氯化钠溶液80ml， 配制成氯化钠甲醇溶液。用氯化钠甲醇溶液2ml分三次溶解残渣，均转移到一个15ml的具塞离心管中，加4ml正己烷，涡旋混合2min。然后4000r/min 离心4min， 吸取上层正己烷弃去，重复上述操作一次。水相加乙酸乙酯3ml，混合 2min，4000r/min离心4min，吸取上层乙酸乙酯，同样的步骤重复两次。然后氮气吹干，用3ml5%的乙腈-水溶解，待柱净化。 2.3固相萃取柱净化 准备好 C18小柱，顺序用5ml甲醇， 5ml三氯甲烷，5ml甲醇和5ml水活化 Cis柱。将处理好的样品转移到柱上，用5ml水淋洗，然后用6ml乙腈洗脱，收集在离心管中，用氮气 吹干，待衍生化。 2.4衍生化 向干的残留物中加入100ul 衍生化试剂，盖塞并涡旋混合10s。在65℃的水浴中反应60min， 然后用氮气吹除多余的试剂。加入 0.25ml正己烷，涡旋混合10s， 供色谱分析使用。标准溶液，吹干后，采用同样的衍生化方法处理。 3. 测定 3.1色谱条件 表1.典型仪器分析条件 检测器 ECD 色谱柱： TG-5ms 色谱柱长 30m 色谱柱内径 0.25mm 色谱柱膜厚 0.25um 温度： 进样口 250℃ 检测器温度 300℃ 柱温 100℃(1min)-10℃/min-280℃(9min) 载气： 氦气 流速 恒流 2ml/min 进样方式 无分流进样 分流时间 lmin 分流比： 20：1 进样量 1.0pL 分析结果与谱图 1.气相色谱对氯霉素分析结果 图1.0.1ppm 氯霉素标准样品色谱图 2.工作曲线、回收率和精密度 配置浓度分别为 200，100，50，20，10，5ug/L的标准样品，衍生化后，用 ECD 模式下检测，得到的线性、检出限结果如表2所示 表2方法线性关系、检出限、定量限 化合物 保留时间 线性范围 相关系数 检出限 定量限 min mg/L r2 ug/L ug/L 氯霉素 17.38 0.005-0.2 0.997 2.0 5.0 称取饲料样品，分别添加2个水平浓度的标准品，每个浓度水平平行测定5次。结果表明，平均回收率为80-85%，相对标准偏差(RSD，n=5)为1.4-5%。回收率和精密度数据结果见 表3 表3方法回收率和精密度数据 化合物 添加水平(0.010mg/L) 添加水平(0.020mg/L) 回收率(%) RSD(%) 回收率(%) RSD(%) 氯霉素 78.5 4.25 84.2 3.71 3.实际样品 称取5.0g购得的猪饲料中，平行检测两次，未检出氯霉素残留。 结论 Thermo Scientific 的气相色谱TTrace 1310分析饲料中的氯霉素检测限可以达到2ug/kg，定量限达到5ug/kg，优于 GB/T 8381.9-2005 中对于饲料中氯霉素 5ug/kg 的检测限要求。在分析氯霉素质量浓度为 5-200ug/kg时，线性良好，重现性。 ( 参考文献 ) [1]蒋定国，杨大进， 动物性食品中氯霉素残留检测技术的研究概况[J].中国食品卫生杂志：2002，14(2)：44-47； ( [2]徐继林，严小军，徐年军，冯凯，对虾中虾留氯霉素的化学源 GC/MS 分析[J].中国 水产科学：2004，11(2)： 111： ) ( [3]GB/T8381.9 - 2005饲料中氯霉素的测定气相色谱法：2 - 3 ) 氯霉素（Chloramphenicol，CAP）是一种广泛使用的广谱类抗生素，由于它对人体具有严重的毒副作用【1】，医学界至今还没有确定氯霉素的人体安全接触剂量。美国和欧盟都禁止在食用性动物和动物饲料中使用氯霉素【2】，在法规中CAP 的残留量为不得检出。 气相色谱的ECD 检测器对于具有强电子亲和力的化合物有较高的灵敏度，而本实验采用Thermo Scientific Trace1310 气相色谱，在分析饲料中的氯霉素时，简单、方便，重现性好。 Thermo Scientific 的气相色谱 Trace 1310 分析饲料中的氯霉素检测限可以达到2ug/kg,定量限达到 5ug/kg,优于 GB/T 8381.9-2005 中对于饲料中氯霉素 5ug/kg 的检测限要求。在分析氯霉素质量浓度为5-200ug/kg 时，线性良好，重现性。