小麦中脱氧瓜萎镰菌检测方案(液相色谱仪)

LAAN-A-LM-C014岛津SHIMADZULC/MSLiquid Chromatography Mass Spectrometry Applicationn.NNo.C103News岛津企业管理(中国)有限公司岛津(香港)有限公司http：//www.shimadzu.com.cn用户服务热线电话： 800-810-0439第一版发行行：2015年3月 使用三重四极杆 LC/MS/MS 同时测定小麦中的脱氧瓜萎镰菌醇等4种成分 Simultaneous Analysis of Nivalenol， Deoxynivalenol， 3-Acetyldeoxynivalenol and 15-Acetyldeoxynivalenol Using Triple Quadrupole LC/MS/MS [LCMS-8050] 瓜萎镰菌醇和脱氧瓜萎镰菌醇是由镰孢菌产生的霉菌毒素。日本相关部门在2002年5月21日颁布的《关于小麦脱氧瓜萎镰菌醇的暂定参考值设定》(食安发第0521001号)中，将脱氧瓜萎镰菌醇的暂定参考值设定为 1.1 ppm. 在《关于脱氧瓜瓜镰菌醇的试验方法》(食安发第0717001号，2003年7月17日)中规定，使用HPLC进行定性和定量分析， ■标准溶液的分析 Analysis of a Standard Mixture 图1为4种混合标准溶液(浓度各为10ppb)在进样量为 2 uL时的色谱图；表1为重复测定6次得到的保留时间和峰面积的相对标准偏差(%RSD)。瓜萎镰菌醇类通过电喷雾离子化(ESI)法的负离子模式进行检测。单独使用水和乙腈做流动充就能在 LCMS上分析，但是若在流动相A中加入低浓度的醋酸铵(0.5mmol/L)则可以提高灵敏度。图1为若干待测 MRM 离子对中灵敏度最好的离子对色谱图。表2为分析条件。 我们对 10ppb标准溶液(浓度约为暂定参考值的1/100)重复分析6次。表1为保留时间和峰面积的相对标准偏差(%RSD)。由表1可知，保留时间和峰面积的重复性良好。 表1重复性(10ppb， n=6) 保留时间%RSD 峰面积%RSD 瓜萎镰菌醇 0.04 2.57 脱氧瓜萎镰菌醇 0.04 6.52 15-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 0.06 4.09 3-乙酰脱氧瓜萎廉菌醇 0.05 2.58 LC/MS 进行证证试验。本文向您介绍使用 LC-MS/MS，对瓜萎镰菌醇、脱氧瓜萎镰菌醇以及脱氧瓜萎菌醇代谢物3-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇与15-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇同时进行高灵敏度分析的示例。 图1标准溶液的 MRM 色谱图(各10ppb) MRM Chromatograms of a Standard Mixture (10 ppbeach) Linearity of Calibration Curves 使用表2中分分条件得到的校准曲线如图2所示。各分在1-250ppb浓度范围内校准曲线的回归系数R²在0.999以上，表示线性良好。 图24种成分的校准曲线： a)瓜萎镰菌醇b)脱氧瓜萎镰菌醇 c) 15-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 d) 3-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 Linearity of Calibration Curvesa) Nivalenol b) Deoxynivalenolc) 15-Acetyldeoxynivalenoll d)3-Acetyldeoxynivalenol Analysis of Wheat 图3为小麦的预处理步骤。使用多功能色谱柱“MultiSep# 227"(Romer Labs 公司制)和“AutoprepMF-T"(昭和电工株式会社制)对小麦提取液进行纯化。图4为未添加标准品的样品(使用“MultiSep#227"进行预处理)和添加标准品样品的色谱图。在加标样品中，添加的4种标准品最终浓度分别为25ppb(约为暂定 图3预处理 Pretreatment 参考值的1/40)。由图可知，在预处理后的样品色谱图中，未检测到明显的杂质峰。而且，虽然检测到脱氧瓜萎镰菌醇，但是在暂定参考值以下。4种成分的加样回收率为101~107%，表示结果理想，且并未发现基质效应。在使用“AutoprepMF-T”进行预处理的样品中，也得到了相同加样回收率。 d)3-乙酰脱氧瓜萎廉菌醇 Chromatograms of Wheat (Dotted line： Unspiked Sample， Solid line： Spiked Sample， Spiked 25 ppb each)a) Nivalenol b)Deoxynivalenol c)15-Acetyldeoxynivalenol d)3-Acetyldeoxynivalenol 表2分析条件 Analytical Conditions 色谱柱 ： Shim-pack XR-ODS II (150 mmL.×2.0 mm I.D.， 2.2 um) 流动相 ：A0.5mmol/L 醋酸铵-水 ：B乙腈 时间程序 ：5%B(0 min) → 45%B (5.0 min)→95%B(5.01-7.0 min) → 5%B(7.01 min)→ STOP (12min) 流速 ：0.3mL/min 柱温 ：40°℃ 进样体积 ：2pL 离子源电压 ：-3.0kV(ESI-负离子模式) DL 温度 ：100℃ 加热模块温度 ：200℃ 接口温度 ：200℃ 雾化气流速 ：2L/min 干燥气流速 ：10L/min 加热气流速 ： 10L/min MRM 离子对 ：瓜萎镰菌醇 371.05>281.20 ：脱氧瓜萎镰菌醇 355.10>59.00 ：15-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 397.10>59.00 CE：16.0V CE：22.0V CE：22.0V ：3-乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 3 97.10>59.00 CE：26.0V ( 免责声明： ) *本资料未经许可不得擅自修改、转载、销售； *本资料中的所有信息仅供参考，不予任何保证。 ( 如有变动，恕不另行通知。 ) 本文使用LC-MS/MS通过电喷雾离子化ESI法的负离子模式检测了小麦中脱氧瓜萎镰菌醇成分。在1-250ppb浓度范围内线性回归系数0.999以上，重复6次进样峰面积和保留时间重现性良好。25ppb加标回收率101-107%