硝基呋喃类代谢物中含量分析检测方案(液质联用仪)

thermoscientific 全新三重四极杆液质联用仪TSQ Fortis快速检测四种硝基呋喃类代谢物 徐媛明红徐牛生赛默飞世尔科技(中国)有限公司色谱质谱部 关键词 摘要 本文在Thermo ScientificTM全新液相色谱串联质谱三重四极杆平台Thermo ScientificTM TSQ FortisTM平台建立了快速检测四种硝基呋喃类代谢物的方法。此4种化合物在0.05-20 ppb浓度范围内线性关系良好(r2>0.996， 其中AMOZ和AOZ为0.05~20 ppb，SEM为0.1~20 ppb， AHD为0.2~20 ppb)， LOD(AMOZ和AOZ为10 ppt， SEM和AHD为50 ppt)及LOQ均能满足国标规定的检测要求，运用本方法和设备可实现对硝基呋喃类药物代谢物的检出和定量。 1.引言 硝基呋喃类代谢物属于一种人工合成的广谱抗菌药物，主要用于畜禽和水产等动物的抗菌消炎以预防和治疗动物传染疾病，它主要包括呋喃唑酮、呋喃西林、呋喃妥因和呋喃它酮等，该类药物半衰期短，在动物体内代谢速度快，与蛋白结合的代谢物产生稳定的残留，形成的代谢产物3-氨基2-噁唑烷酮(AOZ)、5-吗啉基甲基-3-氨基-2-噁唑烷酮(AMOZ)、氨基脲(SEM)、1-氨基海特因(AHD)。人体通过食品摄入超量的此残留物质后，造成的危害主要是胃肠反应和超敏反应。剂量过大或肾功能不全者，可引起严重的毒性反应；长期摄入可引起不可逆性末端神经损害，如感觉异常、疼痛及肌肉萎缩等。针对硝基呋喃的潜在危害性，世界许多国家都禁止在食用性动物中使用硝基呋喃。国内外对硝基呋喃残留量分析法主要采用液质联用法进行测定，我国目前有如下几种相关的国家和行业标准： GB/T21311-2007《动物源性食品中硝基呋喃类药物代谢物残留量检测方法》(LOQ为0.5 pg/kg)； GB/T20752-2006《猪肉、牛肉、鸡肉、猪肝和水产品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定》(LOQ为0.5 pg/kg)；农业部781号公告-4-2006《动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量的测定》(LOD为0.25 ug/kg， LOQ为0.5 ug/kg)； SN/T 2061-2008《 进出口蜂王浆中硝基呋喃类代谢物残留量的测定》》(LOQ为0.5ug/kg)； SN/T 1627-2005《进出口动物源食品中硝基呋喃类代谢物残留量测定方法》(LOQ为1 pg/kg)。 本文建立了基于Thermo ScientificTM TSQ FortisTM三重四极杆串联质谱仪针对硝基呋喃类药物的检测方法。本方法灵敏度高，稳定性好，远远满足以上标准所规定的检测要求，可为食品安全监控提供有效的技术支持。 2.实验部分 2.1仪器与试剂 2.1.1 Thermo ScientificTM VanquishTM Binary Horizon超高效液相色谱仪 Thermo ScientificTM TSQ FortisTM三重四极杆质谱仪 2.1.2甲醇(色谱纯，美国Thermo Fisher公司)；实验用水为Milli-Q去离子水；甲酸(色谱纯， SIGMA) ( 2.1.3硝基呋喃类4种代谢物标准品均购自德国Dr.Ehrenstrofer公司 ) 2.2化合物信息及溶液配制 2.2.14种硝基呋喃类药物代谢物信息(表1) 化合物信息表 名称缩写 英文名 原药 CAS 分子式 分子量 AOZ 2-NP-AOZ 呋喃唑酮 19687-73-1 c..H.N04 235.06 AHD 2-NP-AHD 呋喃妥因 623145-57-3C08N404 248.05 SEM 2-NP-SEM 呋喃西林 16004-43-6 CHNO 208.06 AMOZ 2-NP-AMOZ 呋喃它酮： 183193-59-1CHN0 334.13 2.2.2储备液：分别精确称取1mg标准品粉末，溶解于2mL甲醇中 2.2.3系列标曲曲线：以50：50甲醇水作为溶剂，稀释成系列标准曲线0.01 -20 ppb 2.3色谱条件： 色谱柱： Thermo ScientificTM Hypersil GOLDTM aQ (1.9 pm， 100x2.1mm)； 柱温：40℃； 进样量：5pL； 流动相：A为水(含0.1%甲酸)，B为甲醇，梯度洗脱程序(表2) 表2梯度洗脱程序 时间 A% B% 流速mL/min 0.00 85 15 0.3 0.50 70 30 0.3 1.50 10 90 0.3 3.00 10 90 0.3 3.10 85 15 0.3 5.00 85 15 0.3 2.4质谱条件： 可加热电喷雾电离源(HESI)，正离子扫描模式；扫描方式： SRM；喷雾电压(+)：3500V；离子传输管温度：300℃； 鞘气压力35 arb； 辅助气压力 5 arb；离子源温度：400℃；碰撞气压力：2mTorr；选择反应监测离子对信息见表3。 表34种化合物及质谱采集参数 化合物 母离子 Tube Lens 子离子 碰撞能 源内裂解 (m/z) 电压(V) (m/z) 量(V) 电压(V) 134.07* 11.57 2-NP-AOZ 236.05 94 104.07 20 19.6 2-NP-AHD 249.05 88 134.05* 11.44 19.45 9.8 104 2-NP-SEM 209.05 96 166.04* 9.51 11.07 13 191.97 2-NP-AMOZ 335.15 106 291.07* 10.9 9.8 262.125 15.57 注：带*的为定量子离子 3.1灵敏度测试 采用上述仪器分析方法，4种硝基呋喃类代谢物在5分钟内均可获得良好的分离，图1为4种硝基呋喃类代谢物在0.5 ppb的浓度下的提取离子流图。 图14种化合物的提取离子流图(0.5ppb) 3.2线性范围测试 采用上述仪器分析方法，对4种硝基呋喃类代谢物进行线性范围测试，线性相关系数r2均大于0.996，线性关系良好。4种硝基呋喃类代谢物线性范围、线性相关系数、LOQ(S/N>10)、LOD结果见表4，化合物标准曲线图见图2。 图24种化合物标准曲线图 化合物 线性范围 相关系数 LOQ LOD RSD% (n=7，C=1ppb) (ppb) (r) (ppb) (ppb) 2-NP-SEM 0.1-20 0.9969 0.1 0.05 4.23 2-NP-AOZ 0.05-20 0.9964 0.05 0.01 2.20 2-NP-AHD 0.2-20 0.9982 0.2 0.05 6.92 2-NP-AMOZ 0.05-20 0.9986 0.05 0.01 1.78 表4 4种化合物的线性范围、相关系数、LOQ、LOD、RSD 3.3稳定性测试 采用上述仪器分析方法，对4种硝基呋喃类代谢物进行稳定性测试，考察浓度1ppb，连续进样7针，实验结果见表4，4种硝基呋喃类代谢物相对标准偏差RSD%均小于7%，结果证明仪器稳定性良好。 图3 2-NP-AMOZ 1ppb 重现性(n=7) 图5 2-NP-AOZ 1ppb 重现性(n=7) 图4 2-NP-AHD 1ppb 重现性(n=7) 图6 2-NP-SEM 1ppb重现性(n=7) 4.总结 本文建立了三重四极杆液质联用仪 (TSQ Fortis)分析4种硝基呋喃类代谢物的检测方法。由实验结果可以看出，基于ThermoScientificTM TSQ FortisTM建立的检测方法不仅具有优异的灵敏度和线性范围，同时具备良好的重现性。本方法可用于硝基呋喃类药物的日常分析检测。 热线8008105118 电话400 6505118www.thermofisher.com ThermoFisherSCIENTIFIC 仅用于研究目的。不可用于诊断目的。◎ Thermo Fisher Scientific Inc. 保留所有权利。所有商标均为 Thermo Fisher Scientific Inc. 及其子公司的资产，除非另有指明。 本文在Thermo ScientificTM全新液相色谱串联质谱三重四极杆平台Thermo ScientificTMTSQ FortisTM平台建立了快速检测四种硝基呋喃类代谢物的方法。此4种化合物在0.05-20 ppb浓度范围内线性关系良好（r2>0.996, 其中AMOZ和AOZ为0.05~20 ppb, SEM为0.1~20 ppb，AHD为0.2~20 ppb），LOD(AMOZ和AOZ为10 ppt，SEM和AHD为50 ppt)及LOQ均能满足国标规定的检测要求，运用本方法和设备可实现对硝基呋喃类药物代谢物的检出和定量。本文建立了三重四极杆液质联用仪（TSQ Fortis）分析4种硝基呋喃类代谢物的检测方法。由实验结果可以看出，基于Thermo ScientificTM TSQ FortisTM建立的检测方法不仅具有优异灵敏度和线性范围，同时具备良好的重现性。本方法可用于硝基呋喃类药物的日常分析检测。