药品中日落黄色素检测方案(液相色谱柱)

ThermoFisherSCIENTIFICThe world leader in serving science 方法开发报告2015-APP-LC-0242015版中国药典色素快速分析(LC-DAD) 赛默飞世尔科技色谱产品应用中心 检测项目 21 种色素分析 样品基体 溶液 仪器型号 Thermo Ultimate 3000： 泵：DGP-3600SD 自动进样器： WPS-3000SL 柱温箱： TCC-3000RS 检测器： DAD-3000 分析柱 Accucore aQ， 2.6um 2.1×150mm(PN：17326-152130) 流动相 1.15种水溶性色素测定 流动相A：醋酸铵20mM；流动相B：乙腈 流速：0.75mL/min 时间 min A% B% 曲线 0 99 1 5 0.3 99 1 5 8 时间 min 35 3 曲线 12 0 24 76 5 12.1 25 75 76 5 16 10.1 5 95 5 16.1 14 1 5 5 24 14.1 1 76 5 20 24 76 5 柱温 40°C 进样量 5uL， 2uL 波长 全扫描 1、前言 色素一般分为天然色素和人工合成色素。药品生产中色素的使用应符合国家药品管理部门的有关规定。中药材和中药饮片不应使用色素，如测定苏丹红Ⅰ等脂溶性色素时，以甲醇为流动相A， 0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱20分钟；测定孔雀石绿等偏碱性水溶性色素时，梯度洗脱32分钟；测定金橙Ⅱ等偏酸性水溶性色素时，!以甲醇为流动相 A， 20mmol/L 乙酸铵为流动相B，梯度洗脱32分钟。多种色素测定时可适当采用流动相梯度洗脱，，可根据情况选择小粒径或柱长较长的色谱柱以提高分离度。 -《中国药典》2015年版。 2样品制备 15种水溶性色素测定： 称取苋菜红、赤赤红、柠檬黄、亮蓝、日落黄、亮蓝 G、橙黄Ⅰ、酸性黑I、酸性橙10、酸性红18、金胺O、孔雀石绿、亮黄、金橙II、罗丹明B对照品，用水溶解并稀释制成 0.1 mg/mL 的溶液作为对照液(赤藓红8.8 ug/mL， 金橙Ⅱ25ug/mL，罗丹明B53ug/mL)；；各取100uL 混合作为混标对照液。 6种脂溶性色素测定： 称取苏丹红1， 苏丹红2，苏丹红3，苏丹红4，苏丹红G， 猩红808对照品，加乙腈-氯仿(2：1)溶解并稀释制成0.1 mg/mL溶液作为对照液。各取 200uL 混合并稀释到4mL 作为混标对照液。 红花水提样品测定： 取红花 300g，用水超声加热提取1小时。经离心、过滤等前处理操作得红花供试液。 “辣条”样品测定： 取某品牌“辣条”，乙腈-氯仿(2：1)萃取，经离心、过滤等前处理操作得“辣条”供试液。 3、测定谱图 (1)15种水溶性色素混标对照液测定谱图 图115种水溶性色素混标对照液谱图 (2)红花水提样品谱图 图2 红花水提样与水溶色素混标叠图(427nm) 图3 红花水提样与水溶色素混标叠图的3D谱图(427nm) (3)6种脂溶性色素混标对照液测定谱图 图4 6 种脂溶性色素混标对照液测定谱图 (4)“辣条”样品测试谱图 图5s “辣条”样品与脂溶色素混标叠图(520nm) 20151115#25 6种混标脂溶性新 3DFIELD min 图6 “辣条”样品与脂溶色素混标叠图的3D谱图(520nm) 4、结果与讨论 15种水溶性色素在2.6um 小粒径色谱柱上可以得到很好的分离，红花水提样品3D 光谱图中几乎看不到427nm以上的吸收，可见无色素添加。6种脂溶性色素在 2.6um小粒径色谱柱上可以得到很好的分离，“辣条”样品 3D 光谱图中几乎看不到520nm 以上的吸收，可以无色素添加。 根据2015版药典色素分析指导原则，需要将色素分成碱性水溶、酸性水溶、脂溶三组来做实验，而且每一组的分析时间都较长，若再加上每针进样平衡时间，总分析时间就更长了；而采用小粒径填料色谱柱分析色素，借助色谱柱的高效性将水溶性色素-起分析，无需分开成酸碱两组，取得良好的分析效果，简化了分析方法，分析用时仅仅12分钟，提高了效率。 5、附录21个色素UV-VIS 光谱图190~800nm 顶点苋菜红 100% at 2.22 min 顶点酸性红18 100% at 2.70 min 190 400 600 800 800 顶点橙黄 100% at 4.53 min 顶点酸性黑1 100% at 6.01 min 顶点亮蓝G 100% at 12.80 min 顶点苏丹红1号100% at 4.04 min 750800 顶点苏丹红2号100% at 7.11 min 190 400 600 800 色素一般分为天然色素和人工合成色素。药品生产中色素的使用应符合国家药品管理部门的有关规定。中药材和中药饮片不应使用色素，如测定苏丹红Ⅰ等脂溶性色素时，以甲醇为流动相A，0.1%甲酸溶液为流动相B，梯度洗脱20 分钟；测定孔雀石绿等偏碱性水溶性色素时，梯度洗脱32 分钟；测定金橙Ⅱ等偏酸性水溶性色素时，以甲醇为流动相A，20mmol/L 乙酸铵为流动相B，梯度洗脱32 分钟。多种色素测定时可适当采用流动相梯度洗脱，可根据情况选择小粒径或柱长较长的色谱柱以提高分离度。——《中国药典》2015 年版。