水产品中孔雀石绿检测方案(固相萃取)

水产品中孔雀石绿检测的固相萃取方法 实验目的 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法， HPLC法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 一、 实验目标物 孔雀石绿(CAS：569-64-2)。 三、 应用范围 本方法适用于水产品中孔雀石绿的检测的 HPLC检测及确证。 四、 参考标准 《GB/T 20361-2006水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相荧光检测法》。《GB/T 19857-2005水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定》。 五、 实验材料 RONCHO 酸性氧化铝固相萃取柱1000mg/6mL(20301AA00006)。 RONCHO PRS 固相萃取柱500mg/3mL(20301PR05003)。 六、 实验步骤 1、样品提取 准确称取鱼肉样品5.0g于50mL离心管1中，加入1.5mL20%的盐酸羟胺，2.5mL1.0mol/L的对甲苯磺酸，5.0 mL 乙酸钠-对甲苯磺酸缓冲液(4.95g无水乙酸钠及 0.95g 对-甲苯磺酸，用乙乙调PH至4.5，定容至1L)，匀浆机均质30s (10000r/min)。加入10mL乙腈，剧烈振辰30s。加入5g酸性氧化铝，震荡30s。离心机离心10 min (3000 r/min) ，取上清液转移至预先加好 10mL 水、2mL二甘醇的离心管2中。加入10 mL 乙腈至离心管1中，重复上述提取一次，合并乙腈层。 离心管2中加入15mL二氯甲烷，振荡10s， 离心 10min (3000r/min)， 取二氯甲烷层于梨形瓶中。继续用5mL 乙青、10mL二氯甲烷重复上述提取一次，合并两次提取的二氯甲烷层。将提取液45℃旋转蒸发至1mL，再用2.5mL乙腈溶解，待净化。 2、SPE柱净化 (1)活化：按照酸性氧化铝柱在上， PRS 柱在下顺序将两柱串联，固相萃取柱使用前使用5mL乙腈活化。 (2)上样和洗脱：将梨形瓶中的待净化液转移至酸性氧化铝柱中净化，梨形瓶使用2.5mLx2的乙腈洗涤瓶两次，弃去酸性氧化铝柱，吹 PRS 柱至近干，在不抽真空的情况下，加入5mL乙腈-0.1 mol/L 乙酸铵 (pH=10)(25：75， v/v)， 收集洗脱液。 (3)重新溶解：洗脱液45℃氮吹至近干，用1mL乙腈定容，过 0.45 um 滤膜，待上机测试。 3、HPLC条件 设备 ： Waters Alliance 2695 色谱柱： WelchUltimateXB-C18(4.6×250 mm， 5um) 检测器 ： Waters 2487 紫外检测器 流动相：A：乙腈B：0.05 mol/L 乙酸铵缓冲溶液 洗脱方式：梯度洗脱 表1梯度洗脱条件 时间/min A(%) B(%) 60 40 3.00 60 40 3.10 80 20 10.00 80 20 10.10 60 40 13.00 60 40 流速：1.2mL/min 检测波长：618nm 进样体积：50 pL 七、实验结果 1、0.1mg/kg鱼肉中孔雀石绿的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 孔雀石绿 93.7 88.5 90.7 90.9 2.27 2、添加水平为0.1 mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图 图1添加水平为0.1 mg/kg鱼肉中孔雀石绿检测的液相色谱图 1孔雀石绿 1 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测水产品中孔雀石绿含量。该方法 可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。