中药中熊果酸检测方案(液相色谱仪)

液相色谱法检测中药中几种果酸的含量     齐墩果酸是从龙胆科植物獐牙菜属的青叶胆全草或女贞子的果实中分离提取而得一种五环三萜类化合物，以游离体和配糖体存在于多种植物中，已成为临床上常用的保肝药物，对四氯化碳引起的大鼠急性和慢性肝损害有明显保护作用，可使炎症、坏死和间质炎症反应减轻，阻止纤维化形成，促进肝细胞的再生，加速坏死组织的恢复作用。有纠正蛋白代谢障碍、消炎、强心、利尿、升高白细胞、降血糖和促进免疫功能、抑制S-180瘤株生长等作用。     熊果酸是存在于天然植物中的一种三萜类化合物，具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。熊果酸临床表现有显著而迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用，具有见效快、疗程短、效果稳定的特点。     目前中药材及中成药中齐墩果酸和熊果酸含量的测定多采用比色或薄层扫描，测得量实际为齐墩果酸和熊果酸含量的总和。本文用HPLC法测定多种中药中齐墩果酸与熊果酸的含量，并测定每种中药中游离形式或成苷形式含量。     仪器准备     LC-600A智能全控液相色谱仪 (​http:​/​​/​www.kj17.com.cn​/​" \t "http:​/​​/​www.kj17.com.cn​/​jishuzhichi​/​_blank​)（南京科捷分析仪器有限公司）由P600高压恒流泵与UV600紫外检测器直接构成等度分析系统。使用WS600工作站可以同时控制数台P600高压恒流泵、UV600紫外检测器及恒温柱箱等，具备多元高压洗脱、波长扫描等功能。广泛应用于研究开发、医药检验、食品检测、化工分析、环境监测等众多分析领域。     分析方法     样品处理：     1.醇提法 分别称取药材粉末1g置于圆底烧瓶中，加入40mL无水乙醇，水浴60℃回流提取2h，定容50mL容量瓶中，过滤，取续滤液测定齐墩果酸及熊果酸的含量。     2. 酸解醇提法 分别取药材粉末1g置于圆底烧瓶中，加入28mL乙醇及6mol/L盐酸12mL，回流提取2h，定量转移至50mL容量瓶中，加入饱和氢氧化钠溶液中和至PH=5，再用乙醇定容至刻度，过滤后取续滤液1mL在3000r/min离心5min，取上清液测定齐墩果酸和熊果酸的含量。     仪器条件：色谱柱ODS柱（150mm×6.0mm，5μm，带保护柱），流动相为甲醇-水-冰乙酸-三乙胺（=87：13：0.04：0.02），使用前经超声脱气处理，检测波长210nm，流速为1.0mL/min，柱温为室温。     谱图分析： 1、齐墩果酸 2、熊果酸