饼干中2,6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚检测方案(固相萃取仪)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 饼干中8种抗氧化剂的分析方法 AF10132 应用及技术服务部 摘要：本实验采用固相萃取结合高效液相色谱的方法，建立了饼干中8种抗氧化剂(PG、TBHQ、NDGA、BHA、Ionox-100、OG、BHT、DG)的检测方法。样品经乙腈提取， Cleanert S C18-N 固相萃取柱净化， Venusil XBP C18(L)色谱柱(4.6×250mm， 5 um， 150A)分离，0.5%甲酸水溶液和甲醇为流动相进行梯度洗脱，外标法进行定量。结果表明：8种抗氧化剂添加量分别为 PG： 129mg/kg、TBHQ： 121 mg/kgNDGA： 119 mg/kg、BHA： 240 mg/kg、Ionox-100： 181 mg/kg、OG： 117mg/kg、BHT： 155 mg/kg、DG： 147 mg/kg 时，回收率在85%~100%之间，能够满足检测要求。 关键词：抗氧化剂；； Venusil XBP C18(L) 色谱柱； Cleanert S C18-N 前言 食品抗氧化剂是能阻止或延缓食品氧化变质、提高食品稳定性和延长贮存期的食品添加剂。氧化反应不仅会使食品中的油脂变质，而且还会使食品退色、变色和破坏维生素等，从而降低食品的感官质量和营养价值，甚至产生有害物质，引起食物中毒。 由于合成抗氧化剂化学性质稳定，价格比较优惠且有较好的效果，在预防脂质氧化的方法中，往往被优先考虑，一般使用的合成抗氧化剂有 BHA、BHT、TBHQ等。 然而由于这些抗氧化剂不是食品成分之一，而且在食品工业中存在很多违规操作，抗氧化剂的添加往往超出规定的标准，越来越多的研究表明：人工合成的抗氧化剂有一定的毒副作用，有害人们的身心健康，因此对食品中合成抗氧化剂的测定显得尤为重要。 本实验建立了高效液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂的方法。 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪(紫外检测器)； ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： serv i ce@agela . com.c n 网址： w w w.agela.c o m.cn 客服：400-606-8099 ) 博纳艾杰尔12位负压 SPE 装置； Qdaura卓睿全自动固相萃取系统。 试剂材料 乙腈、甲醇为色谱纯；实验用水为超纯水，8种抗氧化剂标准品及化学式， CAS号见表1； 表1.食品中8种抗氧化剂中文与英文名称、CAS号 序号 中文名称 英文名称 英文简称 CAS 号 1 没食子酸丙酯 Propyl gallate PG 121-79-9 2 叔丁基对苯二酚 Tert-butylhydroquinone TBHQ 1948-33-0 3 去甲二氢愈创木酸 Nordihydroguaiaretic acid NDGA 500-38-9 4 叔丁基对羟基茴香醚 Butylhydroxyanisole BHA 25013-16-5 5 2，6-二叔丁基-4-羟甲基苯酚 2，6-Di-tert-butyl-4-methylphenol Ionox-100 489-01-0 6 没食子酸辛酯 Octyl gallate OG 1034-01-1 7 2，6-二叔丁基对甲基苯酚 Butylated hydroxytoluene BHT 128-37-0 8 没食子酸十二酯 Dodecyl gallate DG 1166-52-5 一次性无菌注射器； Nylon 针式过滤器 (0.22 um， 直径13mm)； Cleanert S C18-N 固相萃取柱：2000 mg/12 mL； 样品制备 样品提取 称1g样品至 50mL离心管中，加10 mL 乙腈，震荡2 min，超声 10 min， 3000 r/min离心5 min， 收集上清液至鸡心瓶中，再加10mL乙腈，震荡2 min， 超声1 min， 3000r/min 离心 5 min 合并上清液。 样品净化 先将小柱用5mL甲醇，5mL乙腈活化平衡，然后将待净化液上 SPE柱，收集流出液，再用10mL乙乙：甲醇=2：1(V/V)进行淋洗，并收集洗脱液，40℃蒸干，用1mL乙腈溶解残留物，过 0.22 um Nylon针式过滤器后待测。 以上净化步骤可用卓睿全自动固相萃取仪完成。 实验条件 ( Email： service@agela.com. c n 网址： w ww .ag ela.c o m . c n 客服：4 0 0-606-8099 ) 液相条件 色谱柱： Venusil XBP C18 (L)， 5 um， 150A， 4.6×250 mm 流动相： A： 0.5%甲酸水溶液；B：甲醇；流速：1mL/min 柱温：35℃ 进样量：5uL 检测波长：280nm 流动相梯度见表2： 表2.流动相梯度 时间/min A/% B/% 0 40 60 15 30 70 25 0 100 30 0 100 31 40 60 35 40 60 卓睿全自动固相萃取仪 SPE-40 条件： 步骤 指令 溶剂 流速 ml/min 流量ml 1 活化 Methanol 3 5 2 活化 Acetonitrile 3 5 3 收集1样... 空气 3 25 4 收集1样... Acetonitrile+Methanol=2+1 3 10 5 收集1样... 空气 3 10 6 终止 7 8 9 溶剂别名 ( Email： serv i ce@agela . com.c n 网址： w w w .agela.c o m.cn 客服：400-606-8099 ) 结果与讨论 实验结果 由表3可知，采用固相萃取结合液相色谱法检测食品中8种抗氧化剂，手动分析时饼干基质加标8种抗氧化剂回收率 85%~100%，采用卓睿全自动固相萃取仪 SPE-40分析时8种抗氧剂回收率88%~96%，能够满足检测要求。 表3.饼干中8种抗氧化剂加标回收实验结果 手动分析 SPE-40分析 物质名称 保留时间/min 添加水平 回收率 CV 添加水平 回收率 CV /mg/kg /% /mg/kg /% /% PG 4.416 129 92.7 5.8 684 91.8 -2.5 TBHQ 5.974 121 86.0 11.6 540 93.5 -2.6 NDGA 11.095 119 100.3 4.9 484 93.6 -2.1 BHA 12.798 240 98.4 -0.7 852 95.5 -4.5 Ionox-100 17.538 181 99.1 0.4 564 95.5 -4.4 OG 20.627 117 90.4 6.1 380 90.7 -2.5 BHT 26.444 155 89.6 -4.5 604 92.7 -3.6 DG 26.704 147 85.9 7.7 540 88.4 -2.6 图1.8种抗氧化剂标准溶液液相色谱图 (标准浓度： PG：129 ug/mL、TBHQ：121 ug/mL、NDGA： 119 ug/mL、BHA：240 ug/mL、Ionox-100：181 pg/mL、OG： 117 ug/mL、BHT：155 pg/mL、DG： 147 pg/mL) 图2.饼干基质空白液相色谱图 图3.饼干基质加标液相色谱图 (加标浓度： PG： 129mg/kg、TBHQ： 121 mg/kg、NDGA： 119 mg/kg、BHA： 240 mg/kg、Ionox-100： 181mg/kg、OG： 117 mg/kg、BHT： 155 mg/kg、DG： 147 mg/kg) 结论 本实验建立了饼干中8种抗氧化剂的检测方法，并结合高效液相色谱对饼干中 8种抗氧化剂含量进行测定。对于加标量分别为 PG： 129 mg/kg、TBHQ： 121mg/kg、NDGA：119 mg/kg、BHA： 240 mg/kg、Ionox-100： 181 mg/kg、OG： 117 mg/kg、BHT： 155 mg/kg、DG： 147 mg/kg 的饼干样品，8种抗氧化剂回收率在85%~100%之间，符合实验要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil XBP C18(L) 5 um， 150A， 4.6×250 mm 1支 VX952505-L Cleanert S C18-N 2000 mg/12 mL 20支/包 S18200012N QdauraQ卓睿全自动固相萃取系统 4 通道 1台 SPE-40 I5位氮吹仪 15位 1台 NV15-M 保护柱套 适用于4.6×10 mm 和2.1×10 mm 1支 SH-100 直联式保护柱芯 5 um， 150 A； 4.6×10 mm 4支/包 VX950105-LS 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/pk 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE 隔垫 45°Shore A； 1.0 mm 100/pk 0915-1819 Nylon针式过滤器 单膜， 13mm， 0.22 um 200/pk AS021320 一次性注射器 2mL无针头 100支/包 LZSQ-2ML 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真：