吩嗪-1-羧酸中毛细管区带电泳法检测方案(毛细管电泳仪)

第28卷增刊2009年11月Vol.28.Suppl.2009-11分析试验室Chinese Journal of Analvsis Laboratorv 分析试验室Chinese Journal of Analvsis Laboratory第28卷增刊2C09年11月Vol.28.Suppl.2009-11 毛细管区带电泳快速检测分离嗪-1-羧酸 孙 冲1.2.3，杨小弟'，张薇，樊柳荫3，曹成喜*3 (1.南京师范大学化学与环境科学学院，南京210097，2.盐城师范学院化学化工学院，盐城224002；3.上海交通大学生命科学技术学院，上海200240) 摘 要：建立快速检测土壤中吩嗪-1-羧酸(phenazine-1-carboxylic acid， PCA)的毛细管区带电泳方法。优化的分离条件是：15 mmol/L pH 10.5的 Gly-NaOH缓冲溶液，毛细管全长为 53 cm， 有效长度为44 cm， I.D.为 75um，分离电压为25kV，13 mbar 10 s 上样， 248 nm紫外检测。 关键词：吩嗪-1-羧酸(PCA)；毛细管区带电泳；检测 吩嗪-1-羧酸(phenazine-l-carboxylic acid， PCA)是一种对小麦全蚀病、西瓜炭疽病和辣椒疫病等病源菌都有很强的抑制作用的抗生物质，主要是由土壤和海洋环境中的假单胞菌属和链霉菌属等微生物分泌产生。由交大许煜泉教授课题组自主开发的生物农药申嗪霉素 M18主要有效成分是PCA，对枯性性根腐和茎腐病害的防治效果可达80%以上。近年来检测分析 PCA 主要采用薄层色谱、高效液相色谱以及液相-质谱串联等方法。这些方法虽然能检测分离 PCA， 但都存在操作步骤复杂，分离时间长以及有机溶剂污染严重等缺点。本文采取毛细管区带电泳(CZE)快速定性检测分离 PCA， 取得了良好的实验结果。 1实验部分·仪器与试剂 ACS2000高效毛细管电泳仪(北京彩陆科学仪器公司)配备有高压电源和紫外检测器。毛细管(河北永年光学纤维厂)总长为 53 cm， 有效长度为44 cm， 内径为75pm。超纯水装置(SG，德国)用以制备电导率低至0.055 pS/cm 的超纯水， pH酸度计(MT-320，瑞士)用于调节 pH。 PCA来源于交大许煜泉老师实币室(99.9%)，NaH，PO.(分析纯)、Na，HPO，(分析纯)、甘氨酸(分析纯)、甲醇(色色纯)、HCl(分析纯)和NaOH(分 析纯)购于国药集团化学试剂公司。选择苯甲酸(分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司)作为内标，用甲醇配成浓度为1000 pg/mL的溶液。 1.3 实验条件 新毛细管分别用1 mol/L NaOH、高纯水、1 mol/L HCl 及高纯水各冲洗20 min，最后用背景缓冲平衡 30 min。每次进样前用背景缓冲冲洗3 min。进样高度为 13 mbar， 进样时间 10s。 2结果与讨论 2.1 缓冲液种类优化 分别采用 Tris-Hcl 缓冲液， NaH， PO-NaHPO，缓冲液， Gly-NaOH 缓冲溶液分离 PCA 和苯甲酸，考虑到分离度和出峰时间以及峰型峰高，选用Gly-NaOH 缓冲溶液。 2.2缓冲液pH优化 pH对于毛细管分离是十分重要的影响因素。在 pH 9.5~11.5之间对 PCA 与内标苯甲酸的分离度进行考量，选定缓冲液pH为10.5(如图1)。 2.3 电压优化 电压对于保留时间和分离度有重要的影响。一般情况下，电压越高，出峰时间越快，但是电压过高会产生较高的焦耳热。考量10~30 kV电压，选择25 kV作为分离电压(如图2)。 ( *基金项目： NSFC (20675051、20805031)、科技部973重大基础研究计划(2009CB118906)和科技部863支撑计划 (2007BAK26B06、2007AA10Z441)项目资助 ) ( E-mail： yangxiaodi@njnu. edu.cn、cxcao@sjtu. edu.cn. ) 优化的分离条件是：15 mmol/L pH 10.5的Gly-NaOH缓冲溶液，毛细管全长为53 cm，有效长度为 44 cm， I.D.为 75 um，分离电压为 25 kV， 13mbar 10 s 上样，248 nm 紫外检测。该方法简单，用量少且重现性好，可以快速检测分离 PCA。 ( 参考文献 ) ( 朱栋华，祝新德，许煜泉.色谱，2001，19(06)：558 ) 图1 缓冲液 pH的变化对分离度的影响 Hai-Ming Liu et al. Talanta， 2008， 76(2)：276 图2 CZE 分离检测 PCA 的电泳图谱 PCA10 pg/mL， 苯甲酸 100 pg/mL， 缓冲液 pH为10.5， 15mM， 10s上样 Rapid quantitative analysis of phenazine-1-carboxylic acid by capillary zone electrophoresis with UV-detector SUN Chong23， YANG Xiao-di'， ZHANG Wei’， FAN Liu-yin’ and CAO Cheng-xi (1. Nanjing Normal University，Nanjing 210097； 2. Yancheng Teachers University， Yancheng 224002； 3. Shanghai Jiao Tong University， Shanghai200240) Abstract： A novel， simple and useful method for analysis of phenazine-1-carboxylic acid has been developed by CZE.The optimal separation conditions were achieved： 15 mM pH 11.5 glycine buffer， the capillary with total length 53 cmx75 pm ID (effective length 44 cm)， 25 kV， 13 mbar 10 s pressure sample injection， 248 nm UV. Keywords： Phenazine-1-carboxylic acid (PCA)； Capillary zone electrophoresis (CZE)； Analysis —◎China Academic Journal Electronic Publishing House. All rights reserved. http：//www.cnki.net