琥珀止痛膏中樟脑检测方案(毛细管柱)

北京豫维科技有限公司联系人：水先生E电话：：010-61755520药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33(9) 一J1603 北京豫维科技有限公司联系人：水先生电话：：(010-61755520h Ana 013 (9 GC 法测定琥珀止痛膏中樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、皮醛和丁香酚的含量 陈新国，董云平，黄俊忠* (广东省食品药品检验所，广州510180) 摘要 目的：采用 GC 法同时测定琥珀止痛膏中樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的含量，以评价琥珀止痛膏的质量。方法：采用毛细管色谱柱 Restek Rtx-WAX(30 m×0.25 mm×0.25 um)；程序升温：起始温度90℃，保持2 min 后以3 ℃ ·min升至140℃，保持6 min，再以7℃·min升至180℃，保持5 min；进样口温度200℃；检测器温度250℃。结果：在同一色谱条件下，樟脑、薄荷脑、冰片(龙脑和异龙脑)、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚进样浓度分别在0.168~1.68、0.120~1.20、0.202~2.02、0.248~2.48、0.0720~0.720、0.168~1.68 mg·mL范围内呈良好的线性关系；平均加样回收率(n=6)分别为99.9%(RSD=1.3%)、99.7%(RSD=1.8%)、100.0% (RSD=2.1%)、104.0%(RSD =2.0%)、103.4%(RSD =2.8%)和99.3%(RSD=2.0%)。结论：本试验为琥珀止痛膏的分析提供了一种准确可靠的检测方法。 关键词：琥珀止痛膏；樟脑；薄荷脑；冰片；八角茴香油；桂皮醛；丁香酚；气相色谱法 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254-1793(2013)09-1603-04 Determination of camphor， menthol， borneol，star anise oil，cinnamaldehyde and eugenol in Hupo Zhitong plaster by GC CHEN Xin-guo，DONG Yun -ping，HUANG Jun -zhong (Guangdong Institute for Food and Drug Control，Guangzhou 510180，China) Abstract Objective： To develop a GC method to determine camphor， menthol， borneol，star anise oil，cinnamic al-dehyde and eugenol in Hupo Zhitong plaster. Methods：The GC system consisted of a quartz capillary column Rest-ek Rtx-WAX(30 mx0.25 mm ×0.25 um). The temperature programing rose from 90 ℃ (2 min) to 140 ℃ by3℃· min-，lasting 6 min，then 7℃·min- to 180 ℃，lasting 5 min in the end. The temperature of the entranceof the capillary vessel column was 200 ℃，and the temperature of the detector was 250℃.Results：Under the samechromatogram condition，there was linear relation among camphor，menthol，borneol (borneol and isoborneol)， staranise oil， cinnamic aldehyde and eugenol in the range of 0.168-1.68，0.120-1.20，0.202-2.02，0.248-2.48，0.0720-0.720，0.168-1.68 mgmL-，respectively. The average recoveries (n=6) wewreere 99.9%，99.7%，100.0%，104.0%，103.4%，99.3%， respectively，and RSDs were 1.3%，1.8%，2.1%，2.0%，2.8%，2. 0% ， respectively. Conclusion： This experiment provides an accurate and reliable method to control the quality ofHupo Zhitong plaster. Key words： Hupo Zhitong plaster； camphor； menthol； borneol； star anise oil； cinnamic aldehyde； eugenol； GC 琥珀止痛膏以山柰、石菖蒲、黄连、马钱子、斑蝥、威灵仙、天南星、蟾酥、琥珀油、丁香罗勒油、薄荷油、八角茴香油、桂皮油、冰片、樟脑共15味中药，运用现代制药技术，提取其有效成分制成的外用敷贴橡胶膏药，收载于卫生部部颁中药成分制剂第14册。该处方中含有挥发性成分樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚，遇热易挥 发，在橡胶剂生产烘烤过程中及贮存期里损失很大，导致药品质量和稳定性下降，但其质量标准中尚未建立含量测定方法。有关樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的含量测定方法主要有气相色谱法12-12]。为了提高本品的质量，本文建立气相色谱法测定樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的含量，结果更加准确、可靠，为完善琥 ( * 通讯作者 TTel：13512789141； E-mail：hjzh96311@21cn. com ) 珀止痛膏质量标准提供一种更简便快速、准确可靠的方法。 1仪器与试药 SHIMADZU GC -2010 PLUS 气相色谱仪，配有氢火焰离子检测器(FID)和 GCsolution 工作站；对照品樟脑(批号110747-201008)、薄荷脑(批号110728-200506)、冰片(批号110743-200905)、八角茴香油(批号1545-200001)、桂皮醛(批号110710-200714)、丁香酚(110725-200711)购自中国食品药品检定研究院，均为含量测定用；水为高纯水，其他试剂均为分析纯；琥珀止痛膏样品(广州敬修堂<药业>股份有限公司提供，规格为6 cm×10 cm，共4批，批号分别为 T01001、T04003、T07005、T09006)。 2方法与结果 2.1溶液的制备 2.1.1混合对照品溶液 精密称取脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛、丁香酚的对照品适量，加乙酸乙酯制成每1 mL 含樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛、丁香酚分别为0.8、0.6、1.0、1.2、0.4、0.8mg的溶液，即得。 2.1.2 供试品溶液取琥珀止痛膏1片(6cm×10 cm)，剪成20小条(约6 cm×0.5 cm)，除去盖衬，置500 mL烧瓶中，加水300 mL，连接挥发油测定器，自测定器上端加水使充满刻度部分并溢流人烧瓶为止；加入乙酸乙酯8 mL，加热回流4h，放冷，静置分层，将挥发油测定器中的上层液体移至10mL量瓶中，用乙酸乙酯洗涤挥发油提取器3次，洗涤液并入10 mL量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。 2.1.3阴性样品溶液按照处方比例称取除樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚外的其余药味，按制备工艺制成缺樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的阴性样品，照“2.1.2”项下方法操作，即得。 2.2包色谱条件与系统适用性试验色色谱谱：RestekRtx -WAX 毛细管色谱柱(30 m×0.25 mm ×0.25wm)；载气：氮气；检测器：FID，温度250℃；进样口温度：200℃；柱温：程序升温，起始温度90℃，保持2 min 后以3℃·min升至140℃，保持6 min，再以7℃·min升至180℃，保持5 min；分流进样，分流比50：1，进样量1pL。理论塔板数均不低于60000，各组分与相邻峰分离度均不低于1.5，阴性样品色谱无干扰，见图1。 图1 对照品(A)、样品(B)、阴性样品(C)气相色谱图 Fig 1 GC chromatograms of reference substances(A)， sample(B)，and negative samples without camphor， menthol， borneol， star anise oil， cinnamaldehyde and eugenol(C) 1.樟脑(camphor) 2. 薄荷脑(menthol) 3. 冰片(borneol) 4. 冰片(borneol) 5.八角茴香油(star anise oil) 6. 桂皮醛(cinnamaldehyde) 7. 丁香酚(eugenol) 2.3 线性关系考察 精密称取对照品樟脑42.03mg、薄荷脑30.10 mg、冰片50.50 mg、八角茴香油62.04 mg、桂皮醛18.01 mg、丁香酚42.08 mg，置同一25mL 量瓶中，加乙酸乙酯溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备液。精密吸取对照品储备液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0、5.0mL，分别置于5mL量瓶中，用乙酸乙酯稀释至刻度摇匀，即得系列浓度对照品溶液；分别精密吸取1 uL注入色谱仪，测定峰面积，其中冰片峰面积以龙脑和异龙脑峰面积之和计算。以峰面积Y为纵坐标，对照品浓度X(mgmL-)为横坐标，绘制标准曲线并进行线性回归计算，得各组分线性回归方程。结果见表1。各成分的进样浓度在各自的线性范围内与峰面积呈现良好的线性。 表1 各组分线性回归方程 Tab 1 The linear regression equation 化合物 回归方程 线性范围 (linearity range) (compound) (regression equation) /mg·mL- 樟脑(camphor) Y=4.1×10X-5.6×1030.99950.168-1.68 薄荷脑(menthol) Y=4.0×105x-1.3×103 0.9995 0.120-1.20 冰片(borneol) Y=4.0×105X-1.9×1030.9995 0.202-2.02 八角茴香油(star anise oil)Y=3.5×10X-3.5×1030.9995 0.248-2.48 桂皮醛(cinnamaldehyde) Y=3.3×10X+1.1×1030.9995 0.0720-0.720 丁香酚(eugenol) Y=3.6×105X-1.4×1030.9995 51 0.168-1.68 2.4 精密度试验 取同一份对照品溶液，精密量取1pL，按“2.2”项下色谱条件连续进样6次，记录峰面积，樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛、丁香酚峰面积的RSD 分别为0.4%、0.4%、0.4%、0.4%、0.3%和0.3%，结果表明精密度良好。 2.5 重复性试验取同一批号(批号为T01001)的样品6份，每份1片，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定含量，樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛、丁香酚含量平均值分别为6.982、4.929、8.481、9.953、3.168和6.373 mg·片，RSD 分别为0.6%、0.8%0.9%、1.2%、1.5%、1.0%。结果表明本方法重复性良好。 2.6 稳定性试验 取同一份样品(批号为T01001)，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，分别在第0、2、4、6、8、10、12、24h进样测定，结果樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚峰面积的 RSD 分分为0.8%、1.2%、0.8%、0.9%、1.2%、0.9%，表明供试品溶液在24h内各组分稳定性良好。 2.7 回收率试验精密称取樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚对照品适量，配制成含樟脑3.3624 mg·mL-'、薄荷脑2.4080 mg·mL-冰片4.0400 mg·mL-、八角茴香油 4.9632 mg·mL-、桂皮醛1.4408 mg·mL和丁香酚3.3664mg·mL-的混合对照溶液。取已知含量的样品(批号为 T01001)6份，每份半片(6cm×5 cm)，除去盖衬，剪成10小条，置于500 mL锥形瓶中，分别加人含樟脑3.3624 mg·mL-、薄荷脑2.4080 mg·mL-、冰片4.0400 mg· mL、八角茴香油4.9632 mg·mL、桂皮醛1.4408 mg·mL和丁香酚3.3664 mgmL-的混合对照品溶液1mL，按“2.1.2”项下方法制备供试溶液，按上述色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的平均回收率(n=6)分别为99.9%、99.7%、100.0%、104.0%、103.4%和99.3%， RSD 分别为11.3%、1.8%、2.1%2.0%2.8%、2.0%。 2.8 样品含量测定取不同批号的琥珀止痛膏各3份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定，按外标法计算，结果见表2。 表2 样品含量测定结果(mg·片"，n=3) Tab 2 Results of content determination ofsamples (mg per tablet，n=3) 批号 樟脑 薄荷脑 冰片 八角茴香油 桂皮醛 丁香酚 (cinnamal- (batch number) (camphor) (menthol) (borneol) (star anise oil) (eugenol) dehyde) TO4003 6.858 5.003 9.239 10.911 2.885 8.330 T07005 6.154 3.878 8.691 10.571 4.266 8.365 T09006 6.649 4.177 8.880 9.370 4.180 7.568 3 讨论 3.1 样品提取条件的考察 3. 1.1 样品提取方式本论文研究提取的组分为挥发性成分，据有关文献报道，挥发性成分的提取主要有超声法提取和水蒸气蒸馏法提取，实验也比较了这2种提取方法的提取效果，直接用溶剂超声提取，虽然提取时间较短，但其他组分干扰严重，水蒸气蒸馏法提取所制备的供试液相对纯净，杂质干扰大大降低，几种挥发性物质的含量也比较高，故最终确定样品的提取方法为水蒸气蒸馏法。 3.1.2样品提取时间按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，提取时间为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0h，实验结果表明，在0.5~3.0h之内6组分含量随加热时间而增加，在4.0~5.0h之内含量 不再增加且有些组分甚至出现下降趋势，为缩短提取时间和保证提取效果，最终选择提取时间为4.0h. 3.2 色谱条件的考察 3.2.1 柱温 琥珀止痛膏中组分多，曾设4种不同等温条件，分别为120、140、160、180℃，均无法将各组分全部分离，由于樟脑、薄荷脑沸点较低，桂皮醛、丁香酚沸点较高，冰片和八角茴香油沸点介于中间。故采用程序升温法，结果表明，初始温度以90℃为佳；在升温速度方面，樟脑、薄荷脑、冰片这3个组分出峰温度集中在100~140℃，以5℃·min的速率未能将其完全分离，故将升温速度降至3℃·min，各峰分离度均能达到要求。 3.2.2 色谱柱在色谱柱的选择上，考察了3根不同极性的毛细管柱，分别是强极性的 Restek Rtx-WAX 毛细管柱(30mx0.25 mm×0.25 p.m)、中等极性的 Agilent DB -624毛细管柱(30m×0.32 mm×1.80 u.m)和弱极性的 Restek Rtx-1 毛细管柱(30 m×0.25 mm×0.25 pm)，结果表明中等极性的Agilent DB -624 毛细管柱未能将所要测定的6个成分完全分离，未能达到分离要求，而弱极性的Restek Rtx-1毛细管柱虽可以将所要测定的6个成分分离，但相对强极性的 Restek Rtx-WAX 毛细管柱而言，强极性的 Restek Rtx - WAX 毛细管柱的分离度(>8.0)和柱效(>140000)更好，且得到的色谱峰峰形也比较好。因此在实验时选择采用强极性的Restek Rtx-WAX 毛细管柱。 ( 参考文献 ) ( Drug S pecifications Promulgated by the Ministry of Public H e alth，P R China. 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Chin Tradit Pat Med (中成药)，2003，25(11)：879 ) ( (本文于2012年9月6日收到) ) 网址：www. yuweichina.com邮箱watercom GC法测定琥珀止痛膏中樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的含量目的:采用GC法同时测定琥珀止痛膏中樟脑、薄荷脑、冰片、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚的含量,以评价琥珀止痛膏的质量。方法:采用毛细管色谱柱Restek Rtx-WAX(30 m×0.25 mm×0.25μm);程序升温:起始温度90℃,保持2 min后以3℃·min-1升至140℃,保持6 min,再以7℃·min-1升至180℃,保持5 min;进样口温度200℃;检测器温度250℃。结果:在同一色谱条件下,樟脑、薄荷脑、冰片(龙脑和异龙脑)、八角茴香油、桂皮醛和丁香酚进样浓度分别在0.168～1.68、0.120～1.20、0.202～2.02、0.248～2.48、0.0720～0.720、0.168～1.68 mg·mL-1范围内呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=6)分别为99.9%(RSD=1.3%)、99.7%(RSD=1.8%)、100.0%(RSD=2.1%)、104.0%(RSD=2.0%)、103.4%(RSD=2.8%)和99.3%(RSD=2.0%)。结论:本试验为琥珀止痛膏的分析提供了一种准确可靠的检测方法。