银杏制剂中银杏内酯检测方案(液相色谱仪)

结果与讨论2 关键词：液相色谱；电喷雾检测器；银杏；银杏内酯 Key words： HPLC-CAD； Ginkgo； Ginkgolide 引言 银杏内酯化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯(hilobalide； BB)属倍半萜内酯，是目前从银杏叶中发现的唯一的一个倍半萜内酯化合物。银杏内酯A( ginkgolide A； GA)、银杏内酯B(ginkgolide B； GB)、银杏内酯B (ginkgolide B； GB)、银杏内酯C ( ginkgolide C； GC)、银杏内脂M(ginkgolide M； GM)、银杏内脂J( ginkgolide J； GJ)为二萜类化合物，其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。 银杏内酯对血小板活化因子(PAF)受体有强大的特异性抑制作用，其中银杏内酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，它与许多疾病的产生、发展密切相关。而银杏内酯目前认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，其拮抗作用活性与化学结构密切相关。 对于银杏内酯的分析，因其紫外吸收弱，多采用HPLC-ELSD方法。中国药典2010版分析银杏内酯采用正丙醇-四氢呋喃-水，反相色谱分析，所使用溶剂为非常规溶剂，且正丙醇的沸点接近100℃，在检测器上挥发性不好，容易导致噪音增加，导致方法重复性差。另外，由于ELSD灵敏度较低，使用的对照品量较大。本方法采用HPLC-CAD方法，采用常规反相色谱溶剂，并且使用灵敏度更高的CAD检测器，改善了药典方法的上述缺点。 仪器： UltiMate 3000系统，包括有带在线脱气单元的四元梯度泵，自动进样器，柱温箱，电电雾检测器。 柱温：35℃ CAD Ultra检测器： Nebulizer_TempCtrl=On Nebulizer_TemperatureNominal=35[℃] CAD.Data_Collection_Rate= 10 [Hz] ( CAD_1.FilterConstant =Corona ) 图1银杏内酯化合物结构图 进样量：：1pL 流动相条件：甲醇-水，梯度洗脱 表1梯度洗脱表 时间(min) Methanol (%) Water(%) 流速(mL/min) 0 27 73 0.8 10 30 70 0.8 15 35 65 0.8 22 35 65 0.8 取相当于含19.2mg萜类内酯的样品适量，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50mL，称定重量，超声处理(功率250W，频率25KHz)20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20mL，回收甲醇，残渣加水10mL，置水浴中温热使溶解，加2%HCL溶液2滴，用乙酸乙酯振摇提取四次(15mL，10mL， 10mL， 10mL)，合并提取液，用5%醋酸钠溶液20mL洗涤，分取醋酸钠液，用乙酸乙酯10mL振摇提取，合并乙酸乙酯提取液，用水洗涤两次，每次20mL，合并水洗液，用10mL乙酸乙酯提取，合并乙酸乙酯提取液，回收乙酸乙酯至干，残渣用丙酮适量溶解并转移至5mL量瓶中，加丙酮稀释至刻度，摇匀，即得。 标准品色谱图 图4 Sample2测定图谱 图2银杏内酯标准品色谱图 结论 与ELSD方法灵敏度的比较 在灵敏度方面，相同浓度标准进样相同体积，在CAD检测器和ELSD检测器上比较各峰的灵敏度(表2)。结果显示， CAD检测的灵敏度最低也比ELSD高2倍以上。因此，对于银杏内酯检测， CAD检测器可以获得比ELSD更好的灵敏度。 本试验优化了中国药典测定银杏制剂中银杏内酯含量色谱条件，并采用电喷雾检测器(CAD)测定了其含量，可获得比ELSD检测器更好的灵敏度、重现性，以及降低银杏内酯对照品的需求量，大大降低银杏制剂中测定色谱条件的复杂性，提高了方法的适用性，降低了检测成本。 实际样品的分析 两批银杏叶片制剂分析结果见图3，图4。 图3 Sample 1测定图谱 表2 CAD与ELSD检测银杏内酯灵敏度比较 检测器 峰名 信噪比 (S/N) 检测器 峰名 信噪比(S/N) CAD 银杏内酯C 864.1 ELSD 银杏内酯C 111.2 白果内酯 448.0 白果内酯 191.7 银杏内酯A 767.5 银杏内酯A 166.9 银杏内酯B 694.8 银杏内酯B 96.1 thermoscientific.com ( C 2012 T h e rmo Fishe r Scie n tific Inc . Al l ri g hts reserved. All trademarks are the pro p erty of Thermo Fisher Scientific Inc. a nd its s ubsidiaries. Specifications， terms a nd p r icin g are subject to change. Not all products are available in all countries. Please consult your l ocal s ales r epresentative for d e tails. ) 北京 免费服务热线： 上海浦东新金桥路27号6号楼 北京东城区安定门东大街28号 8008105118 邮编：201206 雍和大厦西楼F座7层702-715室 4006505118 电话：021-68654588 邮编：100007 传真：021-64457830 电话：010-84193588 传真：010-88370548 ThermoFisherSCIENTIFIC Thermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified.上海SCIENTIFIC   银杏内酯化合物属于萜类化合物，由倍半萜内酯和二萜内酯组成，是银杏叶中一类重要的活性成分。白果内酯（hilobalide; BB）属倍半萜内酯，是目前从银杏叶中发现的唯一的一个倍半萜内酯化合物。银杏内酯A（ginkgolide A；GA）、银杏内酯B（ginkgolide B；GB）、银杏内酯B（ginkgolide B；GB）、银杏内酯C（ginkgolide C；GC）、银杏内脂M（ginkgolide M；GM）、银杏内脂J（ginkgolide J；GJ）为二萜类化合物，其差别在于含有的羟基数目和羟基连接的位置不同。  银杏内酯对血小板活化因子（PAF）受体有强大的特异性抑制作用，其中银杏内酯的抗PAF活性最高。PAF是血小板和多种炎症组织分泌产生的一种内源性磷脂，是迄今发现的最有效的血小板聚集诱导剂，它与许多疾病的产生、发展密切相关。而银杏内酯目前认为是最有临床应用前景的天然PAF受体拮抗剂，其拮抗作用活性与化学结构密切相关。