柑桔中多菌灵检测方案(液相色谱仪)

29001woThermo Fisher Scientific，San Jose， CA USA is ISO Certified. 关键词：高效液相色谱；在线固相萃取；多菌灵；柑桔 Key words： HPLC； online SPE； Carbendazim；Orange 引言 多菌灵是一种广泛用于保护蔬菜和水果的抗真菌剂，关于其残留量的测定方法较多，美国FDA采用液液萃取，液相色谱UV检测和FLD检测；近期的一些方法多采用离线SPE和LC-MS进行检测，其中SN/T1753-2006采用液相色谱进行分析，处理10mL样品，经过MCX净化，前处理过程繁琐。本实验拟利用DGLC online-SPE技术，建立快速测定柑橘原料和成品中多菌灵残留量的测定方法。 测试条件 仪器： UltiMate DGP 3600系列，包括带有在线脱气单元的双三元梯度泵；带有两个六通阀的柱温箱；紫外检测器。连接图见图1。 柱温：35℃ 检测波长：280nm 进样量：2000pL 流动相组成： 上样净化泵：A，甲醇；B，pH=10氨水； C，5%醋酸分析泵：A，乙乙；B，100mM醋酸铵， 梯度洗脱程序及流速：见表1。 标准品及样品溶液制备 标准品溶液制备：精密量取浓度为100 ppm的多菌灵标准品溶液1mL， 至100mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，制成浓度为1ppm的标准品储备溶液。再分别精密量取储备溶液适量，至100mL量瓶中，加水稀释并定容，制成浓度分别为1、2、5、10和20pg/L的系列标准品溶液。 图1仪器连接图 样品溶液制备：取桔片或成品适量，榨汁机捣碎后，取10g样品，精密称定，至100mL量瓶中，以pH=10的氨水定容至刻度，摇匀后，过滤，取续滤液，0.45pm水膜过滤，进样分析。 结果和讨论 标准品色谱图 (2ppb) 图2标准品色谱图 上样净化泵 Loading pump 分析泵Analytical pump 时间(min) 流速 mL/min A% B% C% 时间(min) Time 流速 mL/min A% B% C% Time 0 2.0 5 0 95 0 0.2 5 95 0 2.5 2.0 5 0 95 15.0 0.2 5 95 0 3.0 1.0 5 95 15.1 0.8 5 95 0 7.0 1.0 20 0 80 18 0.8 5 95 0 10 1.0 20 0 80 18.1 0.8 25 75 0 10.1 1.0 5 95 0 28 0.8 25 75 0 12 1.0 5 95 0 30 0.8 85 15 0 12.1 1.0 95 5 0 30.2 1.0 85 15 0 15 1.0 95 5 0 35 1.0 85 15 0 15.1 1.0 10 0 90 35.2 0.8 5 95 0 18.0 1.0 10 0 90 40 0.8 5 95 0 25 1.0 95 0 5 25.2 1.5 95 0 5 32 1.5 95 0 5 32.1 1.0 5 95 39.5 1.0 5 0 95 40.0 2.0 5 0 95 0 2.0 5 0 95 样品及加标样品谱图(加标量为2ug/Kg) 图3样品及加标样品谱图 方法学考察 方法线性范围、检出限 取系列标准品溶液，进样2000pL，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，考察线性。结果多菌灵在1~20pg/L范围内相关系数r=0.9992，线性相关关系较好。检出限按照信噪比3：1计算，为0.12pg/kg。 回收率实验 分别取桔片原料和成品10g，精密称定，按照20ug/Kg分别加入多菌灵，按照样品溶液制备方法制备样品溶液，进样分析，计算回收率，结果原料的加标回收率为86.6%，成品20pg/Kg的加标回收率为98%。 样品含量测定结果 取5个批次成品和原料，按照样品溶液制备方法制备样品，进样分析，结果见图4~5。 图4成品5个批次和加标样品叠加谱图 (1为4OZ糖水桔片A1；2为4OZ糖水桔片A2；3为29OZ糖水桔片A1； 4 为29OZ糖水桔片A2；5为4OZ糖水桔片A1-1115；6为4OZ糖水桔片A1-1115加加20pg/Kg的谱图) 图5原料5个批次和2ppb标准品叠加谱图 (1为2ppb标准品；2为桔子原料-1115-1；3为桔子原料-1115-2；4为桔子原料-1115-3；5为桔子原料-1115-4；6为桔子原料-1115-5) 讨论 分析柱选择 实验分别采用C18与PAIIC18作为分析柱，从结果可以看出， PAII C18 对目标物保留及分离效果较好，同时此柱pH值耐受范围较宽(2~10)，较适宜作为分析柱。 可行性分析 本实验初步建立了online-SPE-HPLC方法快速测定多菌灵残留量的方法，与标准方法比较，提高了检出限和分析效率。方法对于桔片成品检测良好，基质干扰少，但对于桔片原料或未去皮的桔片原料依然存在基质干扰，或出现假阳性现象，需要结合LC-MS方法做进一步验证。 ( [1]. GB/T18979-2003《进出口浓缩果汁中噻菌灵、多菌灵农残检测方法-高效液相色谱法》 ) ( [2]. Mixed-Mode Solid-Phase Extraction and CleanupProcedures forthe Liquid ChromatographicDetermination of Thiabendazole and Carbendazim i n Frui t Juice s ， JOURNAL OF AOAC INTERNATIONAL VOL. 84， NO.2，2001 )   多菌灵是一种广泛用于保护蔬菜和水果的抗真菌剂，关于其残留量的测定方法较多，美国FDA采用液液萃取，液相色谱UV检测和FLD检测；近期的一些方法多采用离线SPE和LC-MS进行检测，其中SN/T1753-2006采用液相色谱进行分析，处理10 mL样品，经过MCX净化，前处理过程繁琐。本实验拟利用DGLC online-SPE技术，建立快速测定柑橘原料和成品中多菌灵残留量的测定方法。