佐米曲普坦中手性异构体检测方案(毛细管电泳仪)

使用 Agilent 7100毛细管电泳仪拆分佐米曲普坦手性异构体 应用简报 制药行业 作者 摘 要 鲁锐、陈波 安捷伦科技(中国)有限公司 本文采用 Agilent 7100 毛细管电泳系统来拆分佐米曲普坦手性异构体。以内径50 pm、有效长度 56 cm 石英毛细管为分离通道，以30 mmol/L 羟丙基-β-环粘精溶液为电泳缓冲液，佐米曲普坦对照品与R-异构体分离度为3.1，R-异构体在1.25 ug/mL 到 10 ug/mL 之间线性关系良好(r=0.9994)， 定量限为 1.25 pg/mL， 连续进样6次R-异构体峰保留时间 RSD 为 0.135%， 峰面积RSD 为 3.5%， 佐米曲普坦理论塔板数为27000，符合中国药典相关要求。 前言 手性拆分是药物分析的难点，使用传统的液相色谱法来拆分手性异构体，面临色谱柱使用成本高昂、多采用正相流动相体系对环境污染大等问题。佐米曲普坦 (Zolmitriptan) 化学名为(S)-4-[3-[2-(二甲胺基)乙基]-1H-吲哚-5-甲基]-2-恶唑完酮，是目前治疗偏头疼较理想的药物之一。其结构中有一个手性中心，如图1所示，S-构型是有效成分，R-构型是无效成分。本文运用毛细管区带电泳(CZE)有效分离了佐米曲普坦的对映体，并且能够准确定量，精密度良好。 图1.佐米曲普坦和其R-异构体结构 实验部分 电泳条件 本实验根据2015版中国药典二部关于佐米曲普坦R-异构体测定方法建立，分离条件参照中国药典相关内容"。 试剂和样品 磷酸为色谱纯级，购于迪马公司；盐酸为分析纯级，购于百灵威公司；羟丙基-β-环糊精购于 Sigma 公司；水为Millipore Milli-Q超纯水系统现制备的纯水；1 mol/L 氢氧化钠溶液、50 mmol/L磷酸钠缓冲液(pH 2.5) 购于安捷伦科技有限公司；佐米曲普坦对照品品R-异构体对照品来自中国食品药品检定研究院。 电泳缓冲液： 30 mmol/L 羟丙基-B-环糊精，用磷酸调节pH值至2.2的50 mmol/L 磷酸二氢钠缓冲溶液配制毛细管卡盒温度： 25°C检测波长： 225 nm， 4 nm带宽；参比 360 nm，100nm带宽电泳程序： 1.预冲洗，电泳缓冲液冲洗10 min2.进样，35 mbar 进样5s3.应用电压，0.3 min 升高到正 20 KV4.停止时间， 27 min 仪器和设备 结果与讨论 实验采用 Agilent 7100 毛细管电泳系统对佐米曲普坦和其R-异构体进行分析。 按照本文所述电泳方法分离佐米曲普坦和R-异构体，分离效果如图2所示，自上而下A图为佐米曲普坦对照品谱图，B图为R-异构体对照品谱图，C图为系统适用性溶液1谱图，其中佐米曲普坦和R-异构体能够达到完全基线分离。 实验选用 50 pm 内径、有效长度56 cm 的未涂层石英毛细管作为分离管道，部件号 G1600-61211。新毛细管使用前用1 mol/L 氢氧化钠溶液冲洗20 min， 每天使用毛细管前用1mol/L氢氧化钠溶液冲洗5min， 然后用屯水冲洗10 min。 标准品制备 ( 佐米曲普坦对照品溶液：称取佐米曲普坦对照品适量，溶于0.1 mol/L盐酸配成 0.5 mg/mL 溶液。 ) ( R-异构体对照品溶液：称取R-异构体对照品适量，溶于 0 . 1 mol/L盐酸配成 0.5 mg/mL 溶液。 ) ( 系统适用性溶液1：称取佐米曲普坦对照品和R-异构体对照品适量，溶于 0.1 mol/L 盐酸配成含有二者各0.5 mg/mL的溶液。 ) ( R-异构体标准工作溶液：精密量取R-异构体对照品溶液适 量，用 0.1 mol/L 盐酸稀释成 10.0、7. 5 、5. 0 、2.5、1. 2 5 ug/mL 的溶液。 ) 中国药典2015版要求在做系统适用性溶液2的时候，理论塔板数按照佐米曲普坦峰计算不低于5000。本实验所得实际结果如图3所示，佐米曲普坦理论塔板数为27000，佐米曲普坦对照品与R-异构体的分离度为3.1，分离效果良好，并满足中国药典2015版的系统适用性要求。 图3.系统适用性溶液2分离谱图：1，佐米曲普坦；2，R-异构体 连续进样6次系统适用性溶液2进行精密度实验。6次进样叠加谱图结果见图4， 其中R-异构体峰保留时间 RSD 为0.135%， 峰面积RSD 为 3.5%，精密度良好。本实验使用的是未涂层毛细管，为了获得良好的重现性，建议每天新使用毛细管时应当使用1 mol/L 氢氧化钠溶液冲洗活化毛细管。 图4.系统适用性溶液2连续进样6针所得叠加谱图：1，佐米曲普坦；2，R-异构体 根据文中所述实验方法，分别对10.0、7.5、5.0、2.5、1.25 ug/mL 的R-异构体标准工作溶液进行电泳分析，用校正峰面积A对浓度C进行线性回归曲线的绘制。如图5所示，线性回归方程为A=0.00169569*C-0.0000869， r=0.9994，表明在1.25 ug/mL 到 10 pg/mL 之间线性关系良好，定量限为 1.25 pg/mL。 图5.R-异体体线性回归曲线 结论 本文使用毛细管区带电泳拆分佐米曲普坦中的R-异构体，建立了准确可靠的分离方法，并且满足2015版中国药典的系统适用性要求。在实验中佐米曲普坦和R-异构体能够达到基线分离，保留时间和峰面积重现性良好，并且可实现对R-异构体的准确定量分析。另外， Agilent 7100 毛细管电泳系统充用 Chemstation 图形化操作软件，操作起来十分简便，为佐米曲普坦这类化药的异构体分析提供了有力的工具。 ( 参考文献 ) ( 1. 中华人民共和国药典：2015年版二部，2015 ) ( 2. Chiral Analysis with the Agilent Capillary Electrophoresis System， (使用安捷伦毛细管电泳系统进行手性分析)， 5988-4305EN，2001 ) 查找当地的安捷伦客户中心： www.agilent.com/chem/contactus-cn 免费专线：800-820-3278，400-820-3278(手机用户) 联系我们： LSCA-China_800@agilent.com 在线询价： www.agilent.com/chem/erfq-cn www.agilent.com 安捷伦对本资料可能存在的错误或由于提供、展示或使用本资料所造成的间接损失不承担任何责任。 本文中的信息、说明和技术指标如有变更，恕不另行通知。 @安捷伦科技(中国)有限公司，2017 2017年2月16日，中国印刷 5991-7925CHCN Agilent Technologies Agilent Technologies     本文采用 Agilent 7100 毛细管电泳系统来拆分佐米曲普坦手性异构体。以内径 50 µm、有效长度 56 cm 石英毛细管为分离通道，以 30 mmol/L 羟丙基-β-环糊精 溶液为电泳缓冲液，佐米曲普坦对照品与 R-异构体分离度为 3.1，R-异构体在 1.25 µg/mL 到 10 µg/mL 之间线性关系良好 (r = 0.9994)，定量限为 1.25 µg/mL，连 续进样 6 次 R-异构体峰保留时间 RSD 为 0.135%，峰面积 RSD 为 3.5%，佐米曲普 坦理论塔板数为 27000，符合中国药典相关要求。