生物大分子中分子量、含量检测方案(专用色谱柱)

「产品解决方案]WatersTHE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. 「产品解决方案1 沃特世(Waters)BEH SEC系列色为柱专为生物大分子的分析而设计，是生物制药领域质量研究的必备工具，广泛用于工艺研究，质量标准制定和批次放行检测。该系列填料采用沃特世独有的亚乙基桥杂化技术(BEH)，具有出色的pH稳定性。颗粒表面采用经典的二醇基覆盖，结合专利的三重键合技术，保证了出色的耐用性。 沃特世SEC产品已经形成了聚合物分析的整体解决方案。根据蛋白药物的分子量范围，推出了125，200和450三种规格色谱柱，满足各个应用领域的需求。同时，针对HPLC和UPLC系统，分别推出了XBridge和ACQUITY系列产品，满足不同的应用需求，只需调整流速，即可实现UPLC和HPLC方法的无缝转换。 完整的产品规格 图1.ACQUITY UPLC°BEH450、BEH200和BEH125 SEC柱的校准曲线。 最佳的峰形 图2. XBridge Protein BEH SEC 200A和450A色谱柱独特的BEH-二醇基颗粒表面可显著减少该次级作用，从而降低对流动相盐浓度的依赖性。 适合10-150kDa范围内各种蛋白的检测； 柱效更高，能满足同时分析聚合物和碎片的需求； 与硅胶基质的填料相比，具有更少的次级相互作用，峰形更加对称； 独特的BEH颗粒和三重键合工艺，耐用性和稳定性远远超过同类产品； 精确的合成工艺，加上多重的质控检测，保证了无与伦比的批次重现性。 图3.图中显示了沃特世BEH200 SEC蛋白质混标(部件号：186006518)和完整单克隆抗体质量数检查标准品(部件号：186006552，稀释至1mg/mL)在200ABEH 3.5 pm SEC色谱柱(7.8x300 mm)上进行分离的色谱柱使用寿命研究对比。色谱图A和B的峰归属：甲状腺球蛋白(669 kDa)， IgG(150kDa)， 3)BSA(67 kDa)， 4)肌红蛋白(14 kDa)以及尿嘧啶(112 Da)。 在mAb标准品的色谱图中， IgG单体和二聚体的分子量分别约为150 kDa和300 kDa。 采用ACQUITYUPLC H-Class Bio系统进行分离。 XBridge BEH SEC色谱柱一最佳的HPLC分离性能 沃特世XBridge BEH SEC系列色谱柱专为聚合物的HPLC检测而设计。用户可以在现有的仪器上进行出色的聚合物分析和检测。 更窄的峰宽，聚合物分离度大大提高，能达到传统填料柱长增加一倍的效果； 碎片的分离能力明显改善，提高了数据的重现性； 耐压更高(230 bar)，达到了传统填料的3倍，进一步延长了色谱柱的使用寿命。 色谱峰更窄，分离效率明显提高 250A硅胶基质5 pum(图A和C)以及200A， BEH 3.5 um(图B和D)SEC色谱柱上的分离对比。两根色谱柱的规格相同(7.8x300mm)， 谱峰归属为：1)甲状腺球蛋白(669 kDa)， 2) lgG (150 kDa)， 3) BSA (67kDa)，4)肌红蛋白(14kDa)以及尿嘧啶(112Da)。 ACQUITY UPLC SEC色谱柱一引领SEC技术的最前沿 沃特世ACQUITY UPLC技术进一步提高了分离度，或者在更短的时间内实现HPLC的分析效果，在各领域得到了广泛的应用。 ACQUITY UPLC SEC系统解决方案，能将蛋白质或肽单体与其聚合物进行更加快速分离，并进行准确定量。生物制药领域中的各大研发客户，均已将ACQUITY UPLC SEC方法作为研发中的平台化分析方案。 采用HPLC相同的BEH料料和专利键合相技术，具有超强的耐用性和稳定性； 独特的UPLC颗粒技术，凭借原创的技术和丰富的经验，该技术能真正达到UPLC的分离效果，保证更高效的分离聚合物和碎片； 测定速度提高10倍之多，且所消耗的洗脱液更少。 更高的分离性能 图5.比较使用UPLC型SEC相对于传统HPLC SEC在生物治疗用胰岛素表征方面的优点。 极快的分析速度 图6.比较使用UPLC型SEC相对于传统HPLC SEC在生物治疗用单克隆抗体表征方面的优点。 HPLC与UPLC SEC的转换 图7.采用Alliance°HPLC在两根XBridge Protein BEH SEC 200A， 3.5 um， 7.8 x300 mm串联色谱柱(上图)和采用ACQUITY H-Class Bio UPLC在单根ACQUITY UPLC Protein BEH SEC 200A， 1.7 pm， 4.6x300mm色谱柱(下图)对沃特世BEH200 SEC蛋白质标准品(部件号186006518)的分离结果。根据颗粒直径和色谱柱内径调整流速，串联运行的两根HPLC色谱柱的流速为0.42 mL/min，UPLC色谱柱的流速为0.3mL/min。此外，根据色谱柱体积对载样量进行了调整。 出色的质量控制一保证了出色的批次重现性 所有沃特世HPLC和UPLC BEH SEC颗粒均在先进的、ISO认证的生产车间中合成，整个合成过程均需经过全面的QC检测。此外，生产的每批材料均经过蛋白质混合标准品检测，确保了无可比拟的批间一致性，保证已验证方法的成功转移。您在收到新色谱柱后以及在使用的过程中，都要通过常规蛋白标准品进行性能测试。由此您可以：收货后就确定色谱柱的性能。 监测色谱柱状态，以延长使用期。 对可能发生的分离问题进行故障排查。 比对实验室/仪器间的平行性，有利于项目转移 沃特世BEH125 SEC蛋白质混标(部件号186006519)、BEH200 SEC蛋白质混标(部件号186008476)和BEH450 SEC蛋白质混混(部件号186008475)即专门为此目的所设计，科学选择的蛋白和肽标准品能与目标应用完美匹配。 订购信息 产品名称 粒径 规格 部件编号 BEH125 Protein Standard Mix(甲状腺球蛋白，卵清蛋白，核糖核酸酶，尿素) - - 186006519 BEH200 Protein Standard Mix(甲状腺球蛋白， IgG，肌红蛋白，尿嘧啶) - - 186008476 BEH450 Protein Standard Mix(甲状腺球蛋白二聚体，甲状腺球蛋白， IgG， 肌红蛋白，尿嘧啶) - 186008475 XBridge Protein BEH125 SEC保护柱 3.5 um 7.8x30 mm 186007635 XBridge Protein BEH200 SEC保护柱 3.5 um 7.8x30 mm 186007638 XBridge Protein BEH450 SEC保护柱 3.5 pm 7.8x30mm 186007641 XBridge Protein BEH125 SEC 3.5 pm 7.8x150mm 186007636 XBridge Protein BEH125 SEC 3.5 pm 7.8x300 mm 186007637 XBridge Protein BEH200 SEC 3.5 pm 7.8x150 mm 186007639 XBridge Protein BEH200 SEC 3.5 pm 7.8x300 mm 186007640 XBridge Protein BEH450 SEC 3.5 um 7.8x150mm 186007642 XBridge Protein BEH450 SEC 3.5 pm 7.8x300 mm 186007643 ACQUITY UPLC Protein BEH125 SEC保护柱 1.7 pm 4.6x30 mm 186006504 ACQUITY UPLC Protein BEH200 SEC保护柱 1.7 um 4.6x30mm 186005793 ACQUITY UPLC Protein BEH450 SEC保护柱 2.5 pm 4.6x30 mm 186006850 ACQUITY UPLC Protein BEH125 SEC柱 1.7um 4.6x150 mm 186006505 ACQUITY UPLC Protein BEH125 SEC柱 1.7um 4.6x300mm 186006506 ACQUITY UPLC Protein BEH200 SEC柱 1.7 um 2.1x150 mm 186008471 ACQUITY UPLC Protein BEH200 SEC柱 1.7 pm 4.6x150mm 186005225 ACQUITY UPLC Protein BEH200 SEC柱 1.7 um 4.6x300mm 186005226 ACQUITY UPLC Protein BEH450 SEC柱 2.5 pm 4.6x150 mm 186006851 ACQUITY UPLC Protein BEH450 SEC柱 2.5 um 4.6x300 mm 186006852 ELSD出口管(UPLC， 0.004"x6") 430001562 UPLC直连管路(0.005"x1.75"，2件/包装) 186006613 HPLC直连管路 WAT022681 Waters THE SCIENCE OF WHAT'S POSSIBLE. Waters，UPLC，XBridge， ACQUITY， ACQUITY UPLC， Alliance和The Science of What’s Possible是沃特世公司的注册商标。所有其他商标属于各自所有者。 沃特斯中国有限公司 ( 沃特世科技(上海)有限公司 北京： 010 - 52093866 上海：021- 6 156 2 666 广州：020- 2 8296555 成都：028- 6 7653588 香港：852- 2 9641800 ) ( 免费售后服务热线：800(400)820 2676 WWw.waters.com ) 沃特世BEH系列分子排阻色谱柱(SEC)