头孢美唑钠中有关物质检测方案(制备液相色谱)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 头孢美唑钠分析报告 AP10064 应用及技术服务部 摘要： 本实验按照2015版药典标准方法中分离度测试溶液为探针，进行色谱柱筛选。以5-巯基-1-甲基四氮唑和头孢美唑钠标准品为样品考察了符合要求的色谱柱用于该品种系统适用性测试、含量测试、有关物质测试和使用寿命测试。结果表明： (1)VenusilXBP C18 (L)基本适用于头孢美唑钠分析； (2)在分离度溶液中， Venusil XBP C18 (L)对5-巯基-1-甲基四氮唑与其前杂质(未知杂质1)的分离度为5.18，与头孢美唑分离度为12.49，头孢美唑与其后杂质(未知杂质2)分离度为4.14，5-巯基-1-甲基四氮唑和头孢美唑之间未检出杂质峰，均符合标准要求；(3)对照品平行进样6针 RSD 为0.12%，保留时间7.731，柱效16896，拖尾因子0.950，均符合标准要求； (4)含量测定中，头孢美唑保留时间7.739，柱效16531，拖尾因子 0.947，符合标准要求； (5)有关物质测定中头孢美唑峰前后杂质分离度分别为9.39和2.93，符合标准要求； (6)用于头孢美唑钠测试时，进样300针保留时间、柱效和拖尾因子均无显著变化，表明该色谱柱对该样品和流动相有较好耐受性。 关键词：头孢美唑坐；VVenusil XBP C18(L)；高效液相色谱 前言 本实验按照2015版药典二部标准，初步考察了本公司生产的不同 C18 色谱柱用于该品种分析的适用性，最终选择 Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠测试，结果令人满意。 表1.头孢美唑钠样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) Na 实验部分 仪器、试剂与材料 试剂材料 超纯水、甲醇、四氢呋喃、磷酸二氢铵、四丁基氢氧化铵、磷酸； 磷酸二氢铵溶液(取磷酸二氢铵 5.75 g， 加水 730 ml 使溶解，加10%四丁基氢氧化铵 19.2 ml)； 高效液相色谱柱：： VVenusil XBP C18 (L)； 5 um， 150A，，4.6×250mm样品制备 分离度溶液的制备：取头孢美唑钠样品约 25 mg， 置25 ml量瓶中，加6%过氧化氢溶液1ml，放置5 min， 加水20ml， 加每1ml中含5-巯基-1-甲基四氮唑杂质对照品 0.5 mg 的溶液1ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得。 色谱条件 色谱柱：Venusil XBP C18 (L)； 5 um， 150A， 4.6×250 mm； 流动相：磷酸二氢铵溶液-四氢呋喃-甲醇(730∶12.5：300，v/v/v)(用磷酸调节pH至4.5)，等度洗脱； 检测波长：254nm； 流速：1.0mL/min： 柱温：35℃； 进样量：20uL 结果与讨论 系统适用性测定 系统适用性测定图谱 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 图1.空白(水)测定图谱 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性lmin 「mAU*s1 [mAU1 因子 [min]一2.880 2.52881e4 2780.37915 1.28 0.1500 2043 图2.过氧化氢溶液测定图谱 VD1 A. Wavelength=254 nm (E：\博纳艾杰不工作包头他项目管\头美唑\处理的数\完数据女书20140805分度000 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间 k' 峰面积 峰高 对 峰宽塔板数分离度选择性 minl 「mU*s1 [mAU1 因子 minl 2.879 1190.60034 151.55522 1.33 0.1300 2718 3.941 1376.00818 199.14944 1.14 0.1044 7888 5.32 1.37 4.901 - 6751.71191 873.67902 0.87 0.1133 10361 5.18 1.24 7.718 - 2242.79468 218.04382 0.90 0.1517 1434712.49 1.57 8.798 182.89923 18.08932 1.02 0.1550 17851 4.14 1.14 图3.分离度溶液测定图谱 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性 因子 min 「mAU*s1 mAU1 [min11-----7.731 - 2127.39624 231.35352 1.10 0.1400 16896 - - 图4.Std1图谱 minl 「mAU*s1 mAU1 因子 [minj ----|------ ----1-- ----1-----1-------1-------1-----7.735 2125.07886 231.49274 1.10 0.1400 16911 图5.Std2图谱 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性lminl 「mAU*s1 [mAU] 因子 [min] 7.733 2123.62012 230.77121 1.10 0.1400 16902 - 图6.Std3图谱 [minl [mAU*s1 [mAU 因子 [min] ---1--------- ---1-- ---1-----1-------1-------1-----|1-7.739 2123.94043 230.70258 1.10 0.1417 16532 图7.Std4图谱 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 峰面积 峰高 对称 保留时间 k' 峰宽塔板数分离度选择性min [mAU*s] [mAU] 因子 [min] - -| -1 7.736 一 2121.62720 230.83488 1.10 0.1400 16916 - - 图8.Std5图谱 「min1 [mAU*s] [mAU1 因子 [minl 1- -- 一-一--一-1 -1--- ---一-----7.744 - 2120.34204 230.16171 1.10 0.1417 16553 - 图9.Std6图谱 系统适用性测定结果 表 2. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠分离度溶液测定积分结果 名称 保留时间/min 相对保留时间 RRT 分离度 过氧化氢 2.879 0.373 未知杂质1 3.941 0.511 5.32 5-巯基-1-甲基四氮唑 4.901 0.635 5.18 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 头孢美唑 7.718 1.000 12.49 未知杂质2 8.798 1.140 4.14 表 3. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠对照品溶液测定积分结果 进样针数 保留时间/min 峰面积 峰面积平均值 RSD/% 理论塔板数 拖尾因子 1 7.731 2127.396 2 7.735 2125.079 3 4 7.733 7.739 2123.620 2123.940 2123.667 0.12 16896 0.950 5 7.736 2121.627 6 7.744 2120.342 含量测定 含量测定图谱 k'minl 「m己U*s1 [mAU1 因子 minl1 ---7.739 2119.50171 229.49893 1.10 0.1417 16531 - 一 图 10. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠含量测定图谱 含量测定结果 表 4. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠含量测定积分结果 主峰名称 保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 头孢美唑 7.739 16531 0.947 有关物质测定 有关物质样品测定图谱 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 图11. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑关有关物质测定图谱 有关物质样品测定结果 表5. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠有关物质测定积分结果 名称 保留时间/min 相对保留时间 RRT 分离度 未知杂质1 4.707 0.602 - 未知杂质2 5.871 0.752 7.37 头孢美唑 7.806 1.000 9.39 未知杂质3 8.517 1.091 2.93 未知杂质4 9.581 1.227 4.09 未知杂质5 12.157 1.557 7.83 色谱柱寿命测定结果 色谱柱寿命测试图谱 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 「minl 「mAU*s1 [mAU] 因子 [min] ·一l -7.759 2110.28320 229.70526 1.10 0.1400 17017 - 图12.第1针则定图谱 保留时间 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性「min1 「mAU*s1 [mAU] 因子 [min] --1一----一 -1- -11-----1-------1- -1-----17.550 2102.18091 237.82373 1.11 0.1350 17328 图13.第50针测定图谱 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性[min] mAU*s1 「mUl 因子 [min]1- -1 7.525 2096.34448 238.62251 1.10 0.1333 17644 一 一 图14.第100针测定图谱 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性 lminl 「mAU*s1 「mAU1 因子 [min] ---一 - -1-----|- 7.711 2048.49487 224.25034 1.09 0.1383 17212 图15.第150针测定图谱 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email：s er v ice@a g e l a. com .c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性 [min] 「mAU*s1 [mAU] 因子 [min] - ---一----1 -7.741 - 2047.94702 221.78310 1.09 0.1400 16939 - 图16.第200针测定图谱 保留时间 k' 峰面积 峰高 对称 峰宽塔板数分离度选择性因子 「min1 「mAU*s1 [mAU] minl 7.592 2035.65210 228.12215 1.09 0.1367 17098 - 图17.第300针测定图谱 色谱柱寿命测试结果 表6. Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠寿命测试结果 进样针数 主峰保留时间/min 理论塔板数 拖尾因子 1 7.759 17017 0.949 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 50 7.550 17328 0.946 100 7.525 17644 0.943 150 7.711 17212 0.955 200 7.741 16939 0.950 300 7.592 17098 0.952 结论 本实验按照2015版药典二部标准，考察了 Venusil XBP C18 (L)用于头孢美唑钠检测的适用性。结果表明 Venusil XBP C18 (L)色谱柱对于头孢美唑钠分析效果良好，能够满足检测要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil XBP C18 (L) 5 um，150 A， 4.6x250 mm 1支 VX952505-L 保护柱套 适用于 4.6×10mm 和2.1×10mm 1支 SH-100 Venusil XBP C18 (L)直联式保护柱芯 5 um， 150A； 4.6x10mm 4 /pk VX950105-LS 分析型色谱柱温箱 室温+5-50℃，箱内一对夹套 1个 CC-100 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6mm 100/PK 1109-0519 1.5mL样品瓶盖 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 微孔滤膜 单膜，13mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2mL无针头 100支/包 LZSQ-2ML 甲醇 4L/瓶，色谱纯 4×4L/箱 AH230-4 ( 地址：天津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r v i ce@a g e l a. co m. c n 网址： w w w. agela.c o m. c n 客服：400-606-8099 ) 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：