去氢抗坏血酸中含量检测方案(制备液相色谱)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 去氢抗坏血酸分析报告 AP10206 应用及技术服务部 摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射检测器，选择 Venusil HILIC (5 um，100A， 4.6×250 mm)色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法。结果表明：采用蒸发光散射检测器，流动相为0.1%甲酸：乙腈=10：90(v/v)，柱温为30℃，进样量为20匹L时，测得去氢抗坏血酸峰型较好，能够满足分析要求。 关键词：高效液相色谱法；蒸发光散射检测器；去氢抗坏血酸；； Venusil@ HILIC 色谱柱； 前言 抗坏血酸，是具有许多生物学功能的水溶性己糖衍生物，其分子中2位和3位碳原子的两个烯醇式羟基极易解离，释放出H+，而被氧化成去氢抗坏血酸。抗坏血酸和去氢抗坏血酸在人体内形成可逆的氧化还原系统，此系统在生物氧化、还原作用及细胞呼吸中起重要作用。 本实验使用 Venusil@HILIC 色谱柱采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合蒸发光散射检测器，建立了去氢抗坏血酸的分析方法，以期为去氢抗坏血酸的分析提供参考。 表1.去氢抗坏血酸化学信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS号 HO- D HO O 去氢抗坏血酸 Dehydroascorbic Acid C6H6O6 174.11 490-83-5 O O 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器； 试剂材料 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 ) ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 实验用水为屈臣氏蒸馏水；；乙腈、甲酸均为色谱纯试剂； 去氢抗坏血酸对照品：白色粉末，由某药业集团股份有限公司提供； 高效液相色谱柱： VenusilHILIC； 5 um， 100A， 4.6×250 mm。 色谱条件 色谱柱：VenusilHILIC； 5 um， 100 A， 4.6×250mm； 流动相：0.1%甲酸：乙腈=10∶90(v/v)； 流速：1.0mL/min： 柱温：30°C： 进样量：：：20pL； 检测器条件 检测器： ELSD； 雾化室温度：85℃； 载气：超纯氮气； 载气流量：2.0 ln/min 样品制备 称取去氢抗坏血酸对照品5 mg，置10mL样品瓶中，加入5 mL 流动相超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，经0.45 um 滤膜过滤，取续滤液作为对照品储备溶液。分别量取对照品储备液适量，加流动相稀释制成每1.0 mL 中含去氢抗坏血酸 10 pg； 20 pg；30 ug；40pg；50ug的溶液，作为对照溶液。 结果与讨论 本实验采用Venusil HILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，由表2及下图可知，流动相为乙腈和0.1%甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。 表2.去氢抗坏血酸对照品溶液分析结果 序号 浓度(ug/mL) 保留时间/min 峰面积 理论塔板数 拖尾因子 备注 1 10 6.715 61833 11466 1.31 图1 2 20 6.723 167243 10886 1.35 图2 3 30 6.732 279992 10449 1.34 图3 ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 4 40 6.748 395935 10730 1.35 5 50 6.748 500841 11466 1.31 图4 图5 929 图 1. Venusil HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(10 ug/mL) 图 2. Venusil@ HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(20ug/mL) 00 0 123 45678 9 10 11 1213 14151617 1819 20 212223 24 25 0 123 45678 9 10 11 1213 14151617 1819 20 212223 24 25 图3. Venusil HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(30 pg/mL) ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w .ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 图4. Venusil@ HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(40 ug/mL) 80- 图 5. Venusil HILIC 色谱柱用于去氢抗坏血酸对照品溶液高效液相色谱图(50 ug/mL) 结论 本实验采用 VenusilHILIC 色谱柱建立了去氢抗坏血酸的分析方法，根据实验结果可知，采用蒸发光散射检测器，流动相为乙腈和0.1%甲酸，等度洗脱时，对去氢抗坏血酸保留、峰形较好，可满足检测要求。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil@ HILIC 5 um， 100A， 4.6×250mm 1支 VH952505-0 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/PK 1109-0519 1.5 mL样品瓶盖 9 mm 中心孔蓝盖，红色橡胶/米色PTFE 隔垫 45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 微孔滤膜 单膜，13 mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 一次性注射器 2mL无针头 100支/包 LZSQ-2ML ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s e r vi c e@ag e l a .co m. cn 网址： w w w. ag e la.co m . c n 客服：400-606-8099 ) 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：