曲克芦丁中有关物质检测方案(制备液相色谱)

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 曲克芦丁系统适用性溶液分析报告 AP10249 应用及技术服务部 摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 Ch.P2015 版二部曲克芦丁项下方法，使用 Venusil MP C18色谱柱(5 um，100A；4.6×250mm)对曲克芦丁系统适用性溶液进行分离。结果表明：在波长为254 nm， 流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH4.4)、乙腈条件下，VenusilMP C18 色谱柱可用于曲克芦丁有关物质和含量测定中系统适用性溶液的分离。 关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；；曲克芦丁；系统适用性；： Venusil@ MP C18： 前言 曲克芦丁系芦丁经羟乙基化制成的半合成黄酮化合物，能抑制血小板的凝集，有防止血栓形成的作用。同时具有对抗5-羟色胺、缓激肽引起的血管损伤，增加毛细血管抵抗力，降低毛细血管通透性，防止血管通透性升高引起的水肿等作用。 表1.曲克芦丁有关物质样品信息 样品名称 英文名 结构式 分子式 分子量 CAS编号 OH OH HO， HO 曲克芦丁 Troxerutin H .OH C27H30O16 610.52 56764-99-9 OH HO OH HO HO，， HO OH OH H20 H20 LO OH 芦丁 Rutin H20 C27H30O16*3(H2O) 664.57 153-18-4 HO OH OH ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，紫外检测器； 试剂材料 屈臣氏水；乙腈为色谱纯；磷酸二氢钠、磷酸为分析纯； 曲克芦丁系统适用性溶液：由某医药公司提供； 高效液相色谱柱：VenusilMP C18；55 um， 100A，4.6×250mm； 有关物质色谱条件 色谱柱： VenusilMP C18； 5 um， 100 A， 4.6×250 mm； 流动相A： 0.1 mol/L 磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH至4.4)； 流动相B：乙腈； 波 长：254nm； 柱温：30℃； 流速：0.5mL/min； 进样量：10uL。 表2.梯度洗脱程序 时间/min 流动相A/% 流动相B/% 80 20 30 80 20 33 65 35 45 65 35 48 80 20 58 80 20 含量测定色谱条件 ( 色谱柱： V enusilMP C18： 5 um， 100 A ， 4.6×250mm ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 流动相：0.1 mol/L磷酸二氢钠溶液(磷酸调节pH至4.4)：乙腈=80∶20(v/v)； 波 长：254 nm； 柱温：30C：流 速 ：0.5mL/min： 进样量：10uL. 结果与讨论 本实验按照 Ch.P2015 版二部曲克芦丁项下方法，使用 Venusil@ MP C18色谱柱对曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，由表3及图可知，在上述两种色谱条件下，曲克芦丁均具有良好峰形，!与相邻杂质峰分离度均大于1.5，满足药典要求。 表3.曲克芦丁系统适用性溶液实验数据 色谱条件 化合物名称 保留时间/min n 相对保留时间 理论塔板数(USP) 拖尾因子- 分离度(USP) 四羟乙基芦丁 10.723 0.508 13317 1.099 — 有关物质 一羟乙基芦丁 18.256 0.864 18105 1.170 16.478 芦丁 19.777 0.936 18976 1.099 2.723 曲克芦丁 21.121 1.000 17699 1.094 2.222 二羟乙基芦丁 22.935 1.086 18509 1.090 2.772 杂质1 24.183 19255 1.820 杂质2 24.754 — 四羟乙基芦丁 10.066 0.515 13207 1.102 — 一羟乙基芦丁 17.080 0.804 17171 1.140 16.092 含量测定 芦丁 18.541 0.873 18399 1.097 2.736 曲克芦丁 19.550 1.000 17396 1.098 1.771 二羟乙基芦丁 厂 21.250 1.090 18254 1.095 2.782 杂质1 22.386 18619 1.768 杂质2 23.059 8526 0.813 数据文件名：MP-c18-有关物□-系口适用性溶液-4.lcd 样品名：曲克芦丁系统适用性溶液002 电话：022-25321032 传真：022-25321033 图1.Venusil MP C18色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图 数据文件名：MP-c18-有关物勿-系系适用性溶液-4.lcd 图2.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁有关物质系统适用性溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图) 数据文件名：MP-C18-含量量定-系适用性-3.lcd 图3.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图数据文件名：MP-C18-含量口定-系口适用性-3.lcd 图4.Venusil MP C18 色谱柱曲克芦丁含量测定系统适用性溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图) 结论 本实验按照 Ch.P2015版二部曲克芦丁项下方法，使用 VenusilMP C18色谱柱对 ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 曲克芦丁系统适用性溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下， Venusil@MP C18 色谱柱测试结果满足药典有关物质和含量测定的要求，可用于系统适用性溶液的分离分析。 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil MP C18 5um， 100A； 4.6×250mm 1支 VA952505-0 1.5 mL样品瓶 短螺纹透明带书写处 100/PK 1109-0519 32×11.6mm 1.5 mL 样品瓶盖 9mm 中心孔蓝盖，红色象彤/米色 PTFE 隔垫 45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 微孔滤膜 单膜， 13mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T -次性注射器 2mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：话： 传真： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：mail： seservice@agela.com.cn 网址： www.agela.com.cn 客服：