婴幼儿奶粉中婴幼儿奶粉中5种核苷酸检测方案

Agela Technologies博纳艾杰尔产品应用案例 婴幼儿奶粉中5种核苷酸分析报告 AP10139 应用及技术服务部 摘要：本实验采用高效液相色谱 (HPLC) 法结合紫外检测器，按照 GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳制品中核苷酸的测定方法，使用 Venusil@ AQ C18 Plus 色谱柱(5 um， 150A；4.6×250 mm)对5种核苷酸混合标准溶液、某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液进行分析测定。结果表明：在波长为254 nm， 流动相为磷酸盐缓冲溶液(pH3.2)：甲醇=1000∶4(v/v)时， Venusil"AQ C18 Plus色谱柱可将5种核苷酸完全分离，基质样品分离效果与国标标准谱图接近，可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析测定。 关键词：高效液相色谱法；紫外检测器；婴幼儿奶粉；核苷酸；Venusil AQ C18 Plus 前言 核苷酸是生命遗传物质 DNA 和 RNA 的基本组成单位，是体内合成核酸的前身物。婴幼儿正处在快速生长发育阶段，身体对核苷酸的需求量超过体内合成核苷酸的能力，但母乳可为婴幼儿提供所需核苷酸。而对于没有母乳喂养的婴幼儿，食用含足量核苷酸的配方奶粉，不仅可提高免疫力，也可保护婴幼儿肠胃健康。 表1.5种核苷酸样品信息 样品名称 英文简称 结构式 分子式 分子量 CAS号 o HQ OH 胞嘧啶核苷酸 CMP HN- C9H14N3O8P 323.2 63-37-6 // N _O HO O=P-0 OH 次黄嘌呤核苷酸 IMP C10H13N4O8P 348.21 131-99-7 HO OH ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 实验部分 仪器、试剂与材料 主要仪器设备 高效液相色谱仪，紫外检测器； 试剂材料 屈臣氏水；甲醇为色谱纯； 磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、冰乙酸、四丁基硫酸氢铵为分析纯； 胞嘧啶核苷酸对照品、腺嘌呤核苷酸对照品、尿嘧啶核苷酸对照品、次黄嘌呤核苷酸对照品、鸟嘌呤核苷酸对照品：；由某乳制品公司提供； 高效液相色谱柱：： Venusil AQ C18 Plus； 5um， 1150 A，，4.6×250 mm： 样品制备 5种核苷酸混合标准溶液：分别称取核苷酸标准品 CMP、AMP、UMP 各 10 mg、GMP、IMP各5 mg(精确至0.1mg)，用水溶解成并定容至100mL，混匀，即得； 某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液：称取5.0g奶粉样品，用20 mL 热水(50-60℃)充分溶解试样，冷却至室温；用10%乙酸溶液调节 pH至4.1，移至50mL 容量瓶中，定容，滤纸过滤，所得滤液用 0.45 um 滤膜过滤，即得供试品溶液。 色谱条件 色谱柱：Venusil AQ C18 Plus； 5 um，150A， 4.6×250mm； ( 电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com . cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 流动相|：：磷酸盐缓冲溶液(称取 1.360g磷酸二氢钾，加0.4753 g 四丁基硫酸氢铵，加900mL水溶解，用 0.1 mol/L 磷酸氢二钾溶液调 pH至3.2，定容至1000mL)：甲醇=1000： 40(v/v)； 波 长：254nm； 柱温：：25°C： 流速：1.0mL/min： 进样量：10uL。 结果与讨论 本实验按照 GB 5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil AQ C18 Plus 色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，由以下结果可知，5种核苷酸分离度均大于1.5，实现完全分离；对婴幼儿奶粉样品的分离效果与国标标准图谱接近。 表2.5种核苷酸实验数据 样品名称 化合物名称 保留时间/min 理论塔板数 分离度 拖尾因子 备注 CMP 4.322 13595 0.91 UMP 14.615 18296 35.41 0.96 5种核苷酸混标 AMP 17.667 16020 6.15 0.87 图1 GMP 19.177 17972 2.67 0.96 IMP 21.941 18790 4.55 0.98 CMP 4.302 53663 UMP 14.589 17443 39.83 1.25 某品牌婴幼儿奶粉供试品溶液 AMP 17.574 17425 6.12 0.96 图2、图3 GMP 19.100 18188 2.77 0.96 IMP 21.829 21145 4.67 1.10 ( 地址： 天 津经济开发区西区南大街179号 邮编：300462电话：022-25321032 传真：022-25321033 ) ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w .ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 图1.VenusilAQ C18 Plus 色谱柱5种核苷酸混标高效液相色谱图 图 2.Venusil AQ C18 Plus 色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图 图3.Venusil AQ C18 Plus 色谱柱婴幼儿奶粉供试品溶液高效液相色谱图(纵坐标局部放大图) 结论 本本实验按照 GB5413.40-2016婴幼儿食品和乳品中核苷酸的测定中方法，使用Venusil AQ C18 Plus 色谱柱对5种核苷酸混合标准溶液、婴幼儿奶粉供试品溶液进行检测，结果表明在上述实验条件下， Venusil AQ C18 Plus 色谱柱可用于婴幼儿奶粉中5种核苷酸的分析检测。 ( Email： s s e e r v ice@ag el a . com.cn 网址： w w w. ag ela . com . cn 客服：400-606-8099 ) 附：相关产品 产品名称 规格描述 包装数量 订货号 Venusil AQ C18 Plus 5 um， 150A；4.6×250mm 1支 VAP952505-L 1.5 mL 样品瓶 短螺纹透明带书写处32×11.6 mm 100/PK 1109-0519 1.5 mL 样品瓶盖 9 mm中心孔蓝盖，红色橡胶/米色 PTFE 隔垫45°Shore A； 1.0 mm 100/PK 0915-1819 微孔滤膜 单膜， 13 mm， 0.45 um 100个/包 AS021345-T 次性注射器 2 mL 无针头 100支/包 LZSQ-2ML 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编： 地址：天津经济开发区西区南大街 邮编：