卡巴胆碱注射液中含量及有关物质检测方案(离子色谱仪)

韩春霞 赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词：离子色谱；电导； lonPac CS17；卡巴胆碱注射液；含量则定；有关物质 Key words： lon chromatography； conductivity； lonPac CS17； CarbacholInjection； content； related substances 引言 卡巴胆碱为M、N胆碱受体激动药，是人工合成的拟胆碱药，具有双重缩瞳作用，可直接作用瞳孔括约肌上的胆碱受体，即刻产生缩瞳效果；同时有抗胆碱酯酶作用，能维持长时间的缩瞳效果。[1] 卡巴胆碱注射液为中国药典收载品种，目前使用的含量测定方法为紫紫分光光度法，该方法需对卡巴胆碱衍生后才能测定，操作繁琐，易引入误差。本实验使用离子色谱法对卡巴胆碱进行测定，灵敏度高，重现性好，且该色谱条件可同时分离测定卡巴胆碱注射液中含有的杂质胆碱和乙酰胆碱。 测试条件 仪器： ICS5000系统； 柱温：30℃； 淋洗液：5mmol/L甲烷磺酒(MSA)流速：1.00mL/min； 定量环： 20pL 抑制器： CSRS 300 4mm， 自循环模式抑制 检测方式：抑制型电导检测，阳离子自动电解连续再生微膜抑制器CSRS 300 4mm (P/N： 064556)，自循环模式，抑制电流15mA。 样品前处理 取注射液直接进样。 结果和讨论 重现性、线性和灵敏度 取含卡巴胆碱100mg/L、氯化胆碱和乙酰胆碱分别为10mg/L的标准溶液，连续进样6次，峰面积、保留时间、峰高的相对标准偏差(RSD)均低于3%。结果见表1。 在本色谱条件下配制适宜浓度范围的离子标准曲线，卡巴胆碱在20~200mg/L范围内具有良好线性关系，其线性相关系数r=0.9999；胆碱在2~20mg/L范围内具有良好的线性关系，其线性相关系数分别为r=0.9999；氯化胆碱在2~20mg/L范围内具有良好的线性关系，其线性相关系数分别为r=0.9999。在本实验条件下，氯化胆碱的检出限为5.6pg/L， 卡巴胆碱的检出限为9.7 pg/L，乙酰胆碱的检出限为14.0pg/L。 实际样品分析及加标回收 取注射液10mL，加入含卡巴胆碱100mg/L、氯化胆碱和乙酰胆碱分别为10mg/L的标准溶液，混合，进行加标回收实验，三种离子加标回收率均在90~101%之间。色谱图如图1所示。 表1重现性结果 项目 (RSD)/(%) 保留时间(Retention Time) 峰面积 (Peak Area) 峰高 (Peak Height) 氯化胆碱 卡巴胆碱 乙酰胆碱 氯化胆碱 卡巴胆碱 乙酰胆碱 氯化胆碱 卡巴胆碱 乙酰胆碱 6次进样重复性 0.02% 0.04% 0.03% 2.8% 2.7% 2.9% 2.9% 2.8% 2.7% 图1伊班膦酸钠注射液中磷酸盐与亚磷酸盐的分离 三种胆碱类化合物在本实验条件下，可以被很好的分离和测定。此方法不需衍生，操作简单，且方法有很好的特异性和重现性，结果可靠，可用于卡巴胆碱注射液含量与有关物质的同时检测。 ( [1].郑静；王小兵；张冬梅.卡巴胆碱原料药含量 测定方法的改进[J].中国药品标准.2011，2：129- 131. ) ( [2]. 国家药典委员会.《中国药典》.2010年版. . 部[S].2005：130. )