化妆品中罗丹明B的测定检测方案(液相色谱仪)

样品分析 快速、灵敏检测化妆品中的罗丹明B 黄雄风许群赛默飞世尔科技(中国)有限公司 关键词 高效液相色谱，荧光检测， Acclaim C18色谱柱，染料 目标 基于罗丹明B对人体的致畸、致癌性，及其对化妆品等行业的潜在威胁，本文欲通过高效液相色谱-荧光检测建立一种快速、灵敏测定化妆品中罗丹明B的方法。 引言 罗丹明B(CAS号：81-88-9)，又称玫瑰红B、玫瑰精B，俗称花粉红，是一种具有鲜艳颜色的人工合成色素，其结构式见图1。由于罗丹明B鲜艳持久、价格低廉，被广泛应用于化妆品、食品、造纸、制漆、纺织、皮革和瓷器的染色.4根据国际癌症研究组织研究，摄取、吸入以及皮肤接触罗丹明B均会造成急性和慢性的中毒伤害，并且有动物实验表明，该物质吸入时可能引起诱变致癌或致畸.早在1999年，欧美等国家和地区均已禁止用于食品加工中；2006年中国卫生部将其列在《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂品种名单(第一批)》中，禁止在食品中使用，并于2010颁布了SN/T2430---2010年《进出口食品中罗丹明B的检测方法》.目前，虽然国内尚无针对化妆品中罗丹明B的相关规定，但是如果将罗丹明B添加到与人体皮肤直接接触的化妆品中，也会对人体造成致癌或致畸的危害。因此，需要建立一种快速、灵敏测定化妆品中的罗丹明B。 检测罗丹明B的主要方法有液相色谱-质谱法、免疫法10、高效液相色谱(HPLC)法11，12和薄层色谱法1等。由于样品基质的复杂性和罗丹明B的低含量，样品前处理通常需要经过净化和浓缩来完成.4.14本文根据荧光检测器的高灵敏度和高选择性，通过超声萃取，采用高效液相色谱-荧光检测法对化妆品中的罗丹明B进行检测。 ( 仪器 ) ( Thermo Scient i ficM DionexM UltiMateM3 0 00RS 双三元系统， 包括： ) ( -DGP-3600RS 双三元分析泵(具备溶剂脱气功能) ) ( -WPS-3000TRS RS 自动进样器(配置100pL定量环) ) ( -TCC-3000RS柱温箱(具备控温功能) ) ( -FLD-3000RS， SST (检测池体积2pL) ) ( Thermo Scientific Dionex Chromeleon 色谱系统控制软件 ， 版本 6.80或以上 ) 图1.罗丹明B的结构式 ThermoFisher ( 去离子水，18.2 MQ-cm (Therm o Scientific GenPure Pro U V -TOC， P/N 50131948) ) 乙腈 (CH，CN)， HPLC 级(Fisher Chemical， P/N AC610010040)甲醇 (CH，OH)， HPLC 级 (Fisher Chemical， P/N AC610010040)醋酸铵(CH，COONH)， HPLC 级 (Fisher Chemical， Cat. No.A639-500) 罗丹明B标准品，纯度≥95.0%，(上海安谱科学仪器有限公司) 标准储备液1 准确称取0.01g罗丹明B标准品，用水将其定容到10 mL，浓度为 1000mg/L. 标准储备液2 取200pL标准储备液1，并将其加入到980 pL去离子水中，浓度为 20 mg/L 标准工作溶液 将标准储备液2稀释20倍，得到浓度为1000 ug/L的标准溶液；分别取1、2、5mL此标准溶液，均定容至10 mL，依次得到浓度为100、200和500 ug/L的标准溶液；再将100 pg/L的标准溶液分别适当稀释，得到浓度为1、2、5、10、20和50ug/L的标准溶液。这样，用于绘制标准工作曲线的系列标准溶液(标准工作溶液)达到9个，从1~1000pg/L，覆盖3个数量级。 样品前处理 样品 从上海某品牌的化妆品专卖柜购买了指甲油、粉饼和唇彩各一份。分别称取2g的样品，用去离子水定容至5 mL。超声萃取 30 min 后，用孔径为0.45 pm 的滤膜 (ThermoScientific Target2 Nylon Syringe Filters， 0.45 pm， 30 mm， P/NF2500-1)过滤后直接进样。 加标样品 称取2g的指甲油，加入50 pL 浓度为 500 pg/L 的罗丹明B标准品，用去离子水定容至5mL， 加标浓度为5 ug/Kg。 色谱条件 色谱柱： Thermo Scientific Acclaim 120 C18 分析柱，3pm，3×150 mm (P/N 063691) 流动相：j：乙腈/100 mM 醋酸铵(称取7.708g醋酸铵，用水定容至1L)， 40：60 (v/v) 进样体积：1pL 流速：0.5mL/min 柱温：30℃ 检测：荧光， 入550 nm； 入cm 580 nm 实验条件的优化 使用 Acclaim 120 C18分析柱，比较了不同比例的乙腈/水、甲醇/水、乙腈/100 mM 醋酸铵溶液、甲醇/100mM 醋酸铵溶液作流动相的结果。乙腈/水作流动相时，罗丹明B色谱峰有明显的拖尾；而乙腈/100 mM 醋酸铵溶液作为流动相，得到的峰形最好。由于罗丹明B具有较强的荧光吸收，并且荧光检测的高选择性可以很好地消除化妆品中某些不具荧光吸收的物质的干扰。因此，本实验选用灵敏度比紫外检测更高的荧光检测。 方法的重现性、线性范围和检测线 为考察方法的重现性，通过连续进样7次浓度为10 pg/L的标准溶液，得到罗丹明B的保留时间和峰面积的相对标准偏差 (RSD) 分别是 0.09%和0.75%，色谱图见图2。在所述色谱条件下，罗丹明B在2~1000 pg/L范围内具有良好的线性，得到的标准曲线方程为A=288.02c-2261。其中，c代表罗丹明B的浓度(ug/L)，A代表罗丹明B相应浓度所对应的峰面积。线性相关系数R²=0.9995。分别以S/N=3和 S/N=10 作为检测线 (LOD) 和定量线(LOQ)，得到其LOD 为 0.5 pg/L， LOQ 为 2 pg/L。 图2.罗丹明B标准品的重叠色谱图 (10 ug/L， n=7) 为考察化妆品中罗丹明B的添加情况，本研究选取了颜色较为鲜艳的指甲油、粉饼和唇彩作为考察对象。在粉饼和唇彩中罗丹明B无检出，在指甲油中的罗丹明B检出浓度为 13.5 ng/g。图3是指甲油样品的色谱图。基于罗丹明B对人体健康的危害性，应严格控制其在化妆品中，特别是指甲油等颜色鲜艳的化妆品中的含量。国内尚无化妆品中罗丹明B的相关规定，但在欧美等国家和地区已明确禁止。 结论 本文通过高效液相色谱-荧光检测法建立了一种快速、灵敏、简便的测定化妆品中痕量罗丹明B的方法，该方法具有重现性好、线性范围宽、灵敏度高等特点，为质监部门控制化妆品等行业罗丹明的使用提供了技术支持，也适用于化妆品等行业的产品质量控制。 致谢 ( 本文的完成得到了张艳海等同仁的倾力协助，作者在此 表示衷心感谢! ) ( 1.郝燕花.高效液相色谱法测定化妆品的配方成分，硕士 论文，2012. ) ( 2. 胡侠；肖光；潘炜；毛希琴；李鹏.高效液相色谱-串联 质谱法同时测定辣椒粉及辣椒油中的7种罗丹明染料， 色谱，2010，28，590-595. ) ( 3. 张贞理，张平，申大忠.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定水产调味品中的罗丹明B、结晶紫和孔雀石 绿，分析化学，2012，3，487-488 ) ( 4. 杨仁惠，胡立立，许乾丽，史蕙，吴俣，王烈，杨蝉.高 效液相色谱荧光检测法测定辣椒制品中罗丹明B的含 量，现代医药卫生，2013，29，481-483. ) ( 5.International Agency f or Research o n C ancer (IARC)， IARCMonographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk of Chemicals to Man， Volume16： Some Aromatic Amines and Related Nitro Compounds. ) 图3.指甲油样品、指甲油加标和空白的色谱图 ( 6 中国标准出版社，GB2760，食品添加剂使用卫生标准 ) ( .7 中国标准出版社，SN/T2430---2010，进出口食品中罗丹明B的检测方法. ) ( 8. Harris， N .L.； J affe， E.S.； Diebold， J.； F l andrin， G.； Muller- Hermelink， H .K.； Vardiman，J.； L i ster， T .A.； Bloomfield， C.D. The World Health O r ganization (W H O) class i fication of n eo p lastic diseases o f the h ematopoietic a n d lymphoid tissues (Report of the Clinical Advisory Committee meeting， Airlie Hou s e， Virg i nia，November， 1 9 97)， Ann O n col， 1 9 99，10， 1 4 19-1432. ) ( 9. B ains，A.； L u ， G.； Yao， H.； L uthra， R.； Medeiros， L.J. ； Sargent， R.L. Molecular and c l inicopathologic characterization of AML withisolated trisomy 4， Am J Clin Pathol， 2012， 1 37， 3 87-394. ) ( 10 . Gupta， V. ； MindenM.D . ； Yi， Q. L .； Brandwein， J .； Chun， K . Prognostic significance o f t risomy 4 as the s o le c y togenetic abnormality in acute myeloid leukemia， Leuk Res， 2003， 27： 983-991. ) ( 11.薛永权.急性淋巴细胞白血病染色体改变及其意义，诊 断学理论与实践，2011，10，290—291 ) ( 12.李清清，罗军.Ph染色体阳性成人急性淋巴细胞白血 病3例临床分析，内科，2010，5，151-152. ) ( 13.王学文.成人伯基特 (Burkitt) 白血病和淋巴瘤的研究进 展，现代肿瘤医学，2008，16，468-472. ) ( 14.林灵超.固相萃取一HPLC 法测定指甲油中的罗丹明B， 香料香精化妆品，2012，5，33-36. ) 免费服务热线：8008105118400 6505118(支持手机用户) SCIENTIFIC ThermoFisherSCIENTIFICAN_C_LC-