肾上腺素、去甲肾上腺素与异丙肾上腺素中三种物质共同分析检测方案(液相色谱柱)

Nov.24.2016LC Application Lab， Shiseido ChinaNo.31， BDA International Business Park，2 Jing Yuan Street， BeijingEconomic Technological Development Zone，Beijing， China 100176Phone 010-6785-6803， FAX 010-6785-6882 肾上腺素、去甲肾上腺素与异丙肾上腺素的共同分析 本实验室使用资生堂CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6mmI.D. ×250mm色谱柱对客户提供的肾上腺素、去甲肾上腺素及异丙肾上腺素(各约1mg白色粉末)标准品进行分析。首先对标准品混合溶液分析，分析结果如图1. 图1 MG 对三种标品混合物共同分析 HPLC Conditions： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6mmI.D. ×250mm 流动相： (5mM 辛烷磺酸钠， 0.02mM EDTA-2Na， 50mM磷酸二氢钾，磷酸调pH至3.0)：乙腈=80：20流速1mL/min温度检测 40°C PDA280nm 进样量： 2uL 浓 度： 0.33mg/mL(水溶解稀释) HPLC Conditions ： . Column： CAPCELL PAK C18 MG S5 ；4.6mm i.d.×250mm Mobile phase ： (5mMOctansulfonic Acid Sodium Salt， 0.02mM EDTA-2Na， 50mM KH2PO4， adjust pH to3.0 with H3PO4) ： CH3CN=80：20 Flow rate ：1mL/min Temp：40°C Detectionn：PDA280nm Inj.vol.：2pL Sample ：：00.33mg/ml)l (dissolved in H2O) 从结果中看到，进混标样品溶液分析，肾上腺素、去甲肾上腺素与异丙肾上腺素各物质间得到良好的分离及峰形，分别对各单标样品溶液分析来确定各峰归属，结果如图2 Minutes 图2单标样品及空白溶液的分析 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6mmI.D. ×250mm 流动相： (5mM 辛烷磺酸钠， 0.02mM EDTA-2Na， 50mM磷酸二氢钾，磷酸调pH至3.0)：乙腈=80：20 流1mL/min温 检 40°C PDA280nm 进样量： 0.5uL 浓 度： 肾上腺素、去甲肾上腺素与异丙肾上腺素溶液浓度各 1mg/mL(水溶解稀释) HPLC Conditions ： Column ：：CAPCELL PAK C18 MG S5 ；4.6mmi.d.×250mm Mobile phase： (5mM Octansulfonic Acid Sodium Salt， 0.02mM EDTA-2Na， 50mMKH2PO4， adjust pH to3.0 with H3PO4) ： CH3CN=80：20 Flow rate：1mL/minTempp：：440°CDetection：PDA280nm Inj.vol.： 2pL Sample ：1mg/mL Adrenaline，epinephrine 1mg/ mL Norepinephrine 1mg/ mL ISOprenaline (dissolved in H2O) 从图2中看到，去甲肾上腺素峰保留时间为3.39min， 肾上腺素峰保留时间为3.63min， 异丙肾上腺素峰保留时间为4.84min。相同浓度进样，发现去甲肾上腺素响应相对较低，以去甲肾上腺素峰计，进0.33mg/ml混标溶液20mL，所得信噪比为 S/N=20，考察结果如图3。以 S/N=3 作为去甲肾上腺素检出限，计算出去甲肾上腺素检出限约为 1ng。 图3去甲肾上腺素检出限考察结果 HPLC Conditions ： 色谱柱： CAPCELL PAK C18 MG S5； 4.6mmI.D. ×250mm 流动相： (5mM 辛烷磺酸钠， 0.02mM EDTA-2Na， 50mM磷酸二氢钾，磷酸调pH至3.0)：乙腈=80：20 流1mL/min 温 检 40°C PDA280nm 进样量： 20pL 浓 度： 0.33ug/mL(水溶解稀释) HPLC Conditions ： Column ： CAPCELL PAK C18 MG S5 ；4.6mmi.d.x250mmMobile phase： (5mM Octansulfonic Acid Sodium Salt，0.02mM EDTA-2Na，50mMKH2PO4， adjust pH to3.0 with H3PO4： CH3CN=80：20 Flow rate ： 1mL/min Temp：：440°C Detection： PDA280nm Inj.vol.： 20pL Sample ： 0.33pg/mL (dissolved in H2O) 综上实验结果，使用使用资生堂 CAPCELL PAK C18 MG S5；i； 4.6mmI.D. ×250mm (AKAD 08426)色谱柱可以实现三种标准物质的共同分析。 (注：数据存储路径仪器I/E/ZHANGHU/DATE/肾上腺素/20161118) 张虎 郭彦丽