葛根中淀粉含量检测方案(液相色谱仪)

高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量 高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量葛根淀粉为天然野生植物淀粉，无污染，具有天然风味，营养丰富，属高档淀粉。可广泛用于轻工、食品、化工、医药等方面，在国外市场走俏，售价高出普通淀粉３￣５倍。特别是用葛根淀粉可制成各种高级营养保健品，在国际市场很受欢迎。长期以来淀粉的测定是通过将淀粉水解，然后用化学法测定还原糖含量进行定量。本文提出用高效液相色谱法测定淀粉水解后产生的葡萄糖含量来计算淀粉含量，此方法解决了样品中其它还原糖的干扰，提高了定量准确性２  实验部分 １ 仪器与试剂Ｗａｔｅｒｓ２４４型高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ４１０示差检测器、Ｍ５１０泵、六通阀进样器、柱温控制器、泰立化ＴＬ９９００工作站。葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准为Ｓｉｇｍａ公司标准品，水为重蒸水并经０．４５μｍ滤膜过滤，盐酸乙醇、乙醚均为分析纯。 ２ 色谱条件色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｇａｒ－Ｐａｋ－Ⅰ（０．６５×３０ｃｍ）流动相：水；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；检测器：ＲＩ：４×；柱 温：８０℃；进样量：１０μＬ。 ３ 标准样品制备分别精密称取葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准品各２５．０ｍｇ于２５ｍＬ容量瓶中，用水溶解并定容。 ２．４ 样品的制备将风干后的葛根样品粉碎，过６０目筛，称取２．５ｇ样品于２５０ｍＬ三角瓶中，用５０ｍＬ乙醚分三次洗涤，洗去脂类物质。然后再用１００ｍＬ８５％ 洗涤４次，洗去可溶性糖类，弃去洗液。残留物中加１００ｍＬ水和１０ｍＬ２：１ＨＣ Ｌ置沸水浴中回流２．５小时，冷却后过滤，用２０％ＮａＯＨ中和滤液并定容至２５０ｍＬ，经０．４５μｍ滤膜过滤，滤液待上机。３  结果及讨论 ３．１ 样品的测定取１０μＬ标准溶液在上述色谱条件下进行色谱分析，得标准溶液色，重复进样三次，求各标样峰面积３．２Ｌ，在上述色谱条件下进行色谱分析，以进样量与峰面积作标准曲线，得到标准样线性方程及相关系数，线性方程为Ｙ＝２２３８０４．３Ｘ －９２１５０．６，相关系数为ｒ＝０．９９９８，此标准曲线呈良好线性关系（见图３）。 葡萄糖标准曲线３．３方法回收率、精密度及检测限测定将葡萄糖标准样溶液（浓度为１．ｇ／Ｌ）连续进样６次，每次进样１０μＬ，计算相对标准偏差ＲＳＤ值。在选定的色谱条件下，以噪音的５倍峰高对应的葡萄糖含量为最低检测限，计算葡萄糖的检测限。取６份等量样品，其中３份加入淀粉标准按照１．４中方法制备样品溶液进行测定，计算淀粉水解回收率。表１  葡萄糖精密度实验进样次数峰面积（Ｓｘ）相对偏差（Ｓ）相对标准偏差（ＲＤ％）检测限（ｇ／Ｌ）   方法回收率、精密度和检测限编号回收率（％） 不同生长期葛根淀粉含量检测分别对不同生长期的葛根，按上述方法进行淀粉含量的检测， 实验表明， 不同生长期葛根中淀粉含量差异很大， 生长期越长含量越低。实验结果表 ３。  不同生长期葛根淀粉含量 ４  结 论   葛根中含有半纤维素，在酸性水解的过程中可能部分水解成木糖、阿拉伯糖等还原糖，在化学滴定中与葡萄糖同时被直接滴定，影响淀粉含量（数据偏高）。用本文采用的高效液相色谱法测定，葡萄糖与木糖、阿拉伯糖在色谱柱上完全分离（见图４），折算成淀粉量要比滴定法准确。图４ 葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准品的色谱图回收率测定时， 样品中加入的淀粉标准应是分析纯级以上，可完全水解成葡萄糖， 测得回收数据更准确。 得利特北京科技有限公司 高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量高效液相色谱法测定葛根样品中淀粉含量葛根淀粉为天然野生植物淀粉，无污染，具有天然风味，营养丰富，属高档淀粉。可广泛用于轻工、食品、化工、医药等方面，在国外市场走俏，售价高出普通淀粉３￣５倍。特别是用葛根淀粉可制成各种高级营养保健品，在国际市场很受欢迎。长期以来淀粉的测定是通过将淀粉水解，然后用化学法测定还原糖含量进行定量。本文提出用高效液相色谱法测定淀粉水解后产生的葡萄糖含量来计算淀粉含量，此方法解决了样品中其它还原糖的干扰，提高了定量准确性２  实验部分 ２．１ 仪器与试剂Ｗａｔｅｒｓ２４４型高效液相色谱仪，Ｗａｔｅｒｓ４１０示差检测器、Ｍ５１０泵、六通阀进样器、柱温控制器、泰立化ＴＬ９９００工作站。葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准为Ｓｉｇｍａ公司标准品，水为重蒸水并经０．４５μｍ滤膜过滤，盐酸乙醇、乙醚均为分析纯。 ２．２ 色谱条件色谱柱：Ｗａｔｅｒｓ Ｓｕｇａｒ－Ｐａｋ－Ⅰ（０．６５×３０ｃｍ）流动相：水；流速：０．８ｍＬ／ｍｉｎ；检测器：ＲＩ：４×；柱 温：８０℃；进样量：１０μＬ。 ２．３ 标准样品制备分别精密称取葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准品各２５．０ｍｇ于２５ｍＬ容量瓶中，用水溶解并定容。 ２．４ 样品的制备将风干后的葛根样品粉碎，过６０目筛，称取２．５ｇ样品于２５０ｍＬ三角瓶中，用５０ｍＬ乙醚分三次洗涤，洗去脂类物质。然后再用１００ｍＬ８５％洗涤４次，洗去可溶性糖类，弃去洗液。残留物中加１００ｍＬ水和１０ｍＬ２：１ＨＣＬ置沸水浴中回流２．５小时，冷却后过滤，用２０％ＮａＯＨ中和滤液并定容至２５０ｍＬ，经０．４５μｍ滤膜过滤，滤液待上机。３  结果及讨论 ３．１ 样品的测定取１０μＬ标准溶液在上述色谱条件下进行色谱分析，得标准溶液色，重复进样三次，求各标样峰面积３．２Ｌ，在上述色谱条件下进行色谱分析，以进样量与峰面积作标准曲线，得到标准样线性方程及相关系数，线性方程为Ｙ＝２２３８０４．３Ｘ－９２１５０．６，相关系数为ｒ＝０．９９９８，此标准曲线呈良好线性关系（见图３）。 葡萄糖标准曲线３．３方法回收率、精密度及检测限测定将葡萄糖标准样溶液（浓度为１．ｇ／Ｌ）连续进样６次，每次进样１０μＬ，计算相对标准偏差ＲＳＤ值。在选定的色谱条件下，以噪音的５倍峰高对应的葡萄糖含量为最低检测限，计算葡萄糖的检测限。取６份等量样品，其中３份加入淀粉标准按照１．４中方法制备样品溶液进行测定，计算淀粉水解回收率。表１  葡萄糖精密度实验进样次数峰面积（Ｓｘ）相对偏差（Ｓ）相对标准偏差（ＲＤ％）检测限（ｇ／Ｌ）  方法回收率、精密度和检测限编号回收率（％） 不同生长期葛根淀粉含量检测分别对不同生长期的葛根，按上述方法进行淀粉含量的检测， 实验表明， 不同生长期葛根中淀粉含量差异很大， 生长期越长含量越低。实验结果表３。 不同生长期葛根淀粉含量４  结 论  葛根中含有半纤维素，在酸性水解的过程中可能部分水解成木糖、阿拉伯糖等还原糖，在化学滴定中与葡萄糖同时被直接滴定，影响淀粉含量（数据偏高）。用本文采用的高效液相色谱法测定，葡萄糖与木糖、阿拉伯糖在色谱柱上完全分离（见图４），折算成淀粉量要比滴定法准确。图４ 葡萄糖、木糖和阿拉伯糖标准品的色谱图回收率测定时， 样品中加入的淀粉标准应是分析纯级以上，可完全水解成葡萄糖， 测得回收数据更准确。                 得利特北京科技有限公司