血样血浆中雌二醇含量检测方案(二手分析仪器)

ApplicationNote： 388CTSQ Quantum GC气质联用仪结合负化学电离源GC-MS/MS技术测定血浆中雌二醇SCIENTIFICPart of Thermo Fisher Scientific Hans Schweingruber， BC Cha， Ethan Chan， Kefei Wang， Thermo Fisher Scientific， San Jose， CA， USA 雌二醇是一种内源性的激素，，已被发现影响男女的许多生理功能。在疾病诊断以及监控病情发展的过程中，检测血浆和尿液等生物体液中的雌二醇，具有重要的临床应用价值。LC-MS/MS液质联用和GC-MS气质联用这两种方法已经被广泛应用于测定生物体液中的雌二醇，但内源性基质的干扰经常对测量结果有影响，二者各有利弊。LC-MS/MS液质联用的方法，避免了柱上衍生，可测定至 pg 级； GC-MS/MS气质联用的方法，灵敏度更高，可测定至 fg 级。 本文中，介绍了基于GC-MS/MS气质联用技术的三重四极杆质谱 TSQ QuantumGC， 并在负化学电离源(NCI)模式下测定了血浆样品中的雌二醇。雌二醇从血浆中提取出后，用五氟代苯甲酰氯和MSTFA(N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺)进行衍生。结果在柱上能够检测到55 fg的量(相当于血浆中2.5 pg/mL的浓度)。 实验条件样品制备 血浆中雌二醇的提取样由Taylor技术有限公司(Princeton， NJ， USA)提供。通过向1.0mL的空白血浆溶液中加入各种不同浓度的雌二醇标样，并以d4-雌二醇作为内标物，配制出初始样品。将这些样品先通过Bond Elut Catridges固相萃取，再与五氟代苯甲酰氯(去掉酚羟基)和MSTFA(去掉烃羟基)发生衍生化反应，得到待测提取样。最终得到的再生样的体积为45uL。 ( 气相： TRACE GC UltralM and TriplusTM自动 进样木(Thermo Scientific) ) ( 色谱柱：(50%苯基)-聚甲基硅氧烷固定相，15mx0.25mm(内径)，液膜厚度=0.25um ) 进样口：进样量1pL，280℃，不分流模式(1分钟后关闭) ( 炉温：210℃(保持1分钟)，以40℃/min的速度升至290℃(保持0分钟)， 再以4℃/min的速度升至305℃(保持0分钟) ) 载气：He气，恒流模式，流速1.2 mL/min连接管：280℃ 质谱： TSQ Quantum GC ( Thermo Scientific )离子源温度：240℃ 发射电流：200pA 离子源模式：负化学源(以甲烷作为反应气，流速3.8mL/min) 扫描模式： SRM(选择性反应监控) 扫描幅度：0.002m/z 扫描时间：0.15秒 峰宽：对于Q1和Q3，0.7Da(半峰宽) 碰撞气：1.5mTorr(Ar气) 碰撞能量：13V 本研究的目的是开发一种负化学源GC-MS/MS的方法，检验血浆样品中的雌二醇，其浓度范围从2.5pg/mL到250pg/mL。 图1是一张注射了2.5pg/mL雌二醇的血浆样品的典型色谱图。不分流进样1pL的最终提取液，并假定完全回收，即色谱柱上的总进样量是55fg。可以看出，即使是这样低的含量，雌二醇的峰形仍然很好，可以被准确定量。色谱图上的其他峰可能是雌二醇和d4-雌二醇的异构体。 图2是一张5水平点标准曲线，血浆样品中分别注射了2.5，5.0，25，75和250 pg/mL五个浓度梯度的雌二醇。每一个标准点都重复进样3次。得到的标准曲线线性关系好，相关系数R2=0.9976(权重因子=1/X)。本文还分别在7.5(低QC)，50(中QC)和200pg/mL (高QC)三个水平进行样品质量控制(QC)。回收率都在85%~115%，说明该方法准确性高。 图1含有2.5pg/mL雌二醇的一血浆样品的典型SRM色谱图(相当于柱上注射55fg雌二醇) 在TSQ Quantum GC气相质谱仪上开发了一种通过负化学源GC-MS/MS模式测定血浆中雌二醇的方法，其测定的浓度范围在2.5~250 pg/mL， 该方法具有高灵敏度和高准确性。后续的改进工作正在进行，今后将能够通过一次GC-MS/MS分析，测定其他的雌雄激素。 致谢 感谢Taylor技术有限公司的Robert J. White，为我们提供了雌二醇提取样品，并提出很多有用的建议。 1.Bhaskar Sundarram，James A. Settlage， SusanK.Ohorodnik， Paul A. Taylor，“一种结合了GC/MS/MS和LC/MS/MS两种技术定量测定雌二醇，雌素酮，磺化雌素酮，甾酮和雄(甾)烯二酮的生化分析方法”第51届质谱应用论坛ASMS会议， Montreal，Quebec， Canada， June 2003.