饲料中苯甲酸检测方案(固相萃取)

青岛心成发展商贸有限公司 饲料中苯甲酸检测的固相萃取方法 WGLabs MAX 一、实验目的 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法， HPLC法作为分析方法，检测饲料中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 二、实验目标物 苯甲酸 (CAS：65-85-0)。 三、应用范围 本方法适用于饲料中苯甲酸的检测的HPLC检测及确确。 四、参考标准 《NY/T 2297-2012饲料中苯甲酸和山梨酸的测定高效液相色谱法》。 五、实验材料 WGLabs MAX 固相萃取柱 60mg/3ml 六、实验步骤 1、样品提取 准确称取饲料样品2.0 g于50 mL离心管中，加入2%氨水水溶液(v/v) 21 mL， 超声提取10 min， 振荡提取10min， 准确加入0.25 mol/L的亚铁氰化钾溶液2mL、1 mol/L的乙酸锌溶液2 mL， 涡旋混匀。5000 r/min离心5min， 取上清液5 mL转移至25 mL容量瓶中，用2%氨水水溶液(v/v)定容至25mL，备用。 2、SPE柱净化 (1)活化： MAX 固相萃取柱使用前用3mL甲醇、3mL水活化。 (2)上样和洗脱：在MAX固相萃取柱上加入5mL备用样品，弃去流出液；用3mL 2%氨水水溶液(v/v)、3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用5%甲酸甲醇溶液(v/v)2mL先脱，收集洗脱液(整个上样、洗脱过程保持流速1 mL/min)。 (3)重新溶解：洗脱液过0.45 um滤膜，上机测试。 3、HPLC条件 设备：Waters Alliance 2690 色谱柱： Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm， 5um) 检测器： Waters 2487 紫外检测器 流动相：A：乙腈 B：磷酸盐缓冲溶液(称取磷酸二氢钾2.5g+磷酸氢二钾 2.5g，加水溶解定容到1000mL) 洗脱方式：等度洗脱A：B=10：90 流速：1.0 mL/min 检测波长：230nm 进样体积：20 pL 七、实验结果 1、25mg/kg饲料中苯甲酸的添加回收结果 表125mg/kg饲料中苯甲酸的添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 苯甲酸 98.11 99.00 103.12 100.08 2.67 2、添加水平为25 mg/kg饲料中苯甲酸检测的液相色谱图 图1添加水平为25 mg/kg饲料中苯甲酸检测的液相色谱图 1苯甲酸 1 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测饲料中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。具体操作步骤详见附件！！！