菊科植物组织中RNA检测方案(研磨机)

    从菊科植物组织中提取RNA是进行菊科植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析，纯化m RNA以用于体外翻译或建立c DNA文库，RT-PCR及差示分析等分子生物学研究，都需要高质量的RNA。因此，从菊科植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA是顺利进行上述研究的关键所在。植物RNA提取常用的方法有异硫氰酸胍法、盐酸胍法、SDS-酚法、CTAB法、酸酚法、一步法以及TR IZOL等商品化的试剂盒等，每种方法对于提取完整的RNA都有各自的优缺点。    有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA，而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。其主要困难在于在这些植物组织中，或富含酚类化合物，或富含多糖，或含有某些尚无法确定的次级代谢产物，或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的，但当组织被研磨，细胞破碎后，这些物质就会与RNA相互作用。比如，蛋白质是污染RNA样品的一个重要因素。由于RNase  和多酚氧化酶属于蛋白质，因而要获得完整的、高质量的RNA就必须有效地去除蛋白质。常规的方法是在冷冻的条件下研磨植物材料以抑制RNase 等的活性；提取缓冲液中含有蛋白质变性剂，如苯酚、胍、SDS、十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）等，这样在匀浆时可以使蛋白质变性，凝聚；有的方法是利用蛋白酶K来降解蛋白杂质。进一步可以用苯酚、氯仿抽提去除蛋白质。    本文用盐酸胍法提取菊科植物中总RNA，通过多样品组织研磨仪处理菊科植物样品与传统研磨破碎方法处理得到的结果进行对比，说明在提取菊科植物总RNA过程中样品低温研磨的处理过程十分重要，多样品组织研磨仪是一个较好的选择，在RNA提取中避免了研磨、匀浆、超声波处理等传统方法的费力、耗时、低效等诸多缺点。