乳制品及特殊膳食中苯甲酸检测方案(固相萃取)

深圳逗点生物技术有限公司一-biocomma biotechco.，ltd. 牛奶中苯甲酸检测的固相萃取方法 (Copure'M MAX ) 一、实验目的 本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法， HPLC法作为分析方法，检测食品中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。 1二、实验目标物 苯甲酸 (CAS：65-85-0)。 三、应用范围 本方法适用于食品中苯甲酸的检测的HPLC检测及确证。 四、参考标准 《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定高效液相色谱法》。 五、实验材料 Biocomma° CopureMMAX固相萃取柱60mg/3mL(Cat.No. COMAX360)。 六、实验步骤 1、样品提取 准确称取牛奶10 g于50mL离心管中，加入0.25 mol/L的亚铁氰化钾溶液2mL，摇匀，再加入1 mol/L的乙酸锌溶液2mL，摇匀，4000 r/min离心10 min。上清液待净化。 2、SPE柱净化 (1)活化：MAX固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3mL水活化。 (2)上样和洗脱：在MAX固相萃取柱上加入5 mL备用样液，弃去流出液。用3 mL2%氨水水溶液(v/v)、3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用2 mL 5%甲酸甲醇溶液(v/v)洗脱，收集洗脱液(整个上样、洗脱过程保持流速1 mL/min)。 (3)重新溶解：洗脱液过0.45 um滤膜，上机测试。 3、HPLC条件 设备： Waters Alliance 2690 色谱柱： Welch UlItimate XB-C18(4.6×250 mm， 5um) 检测器 ： Waters 2487 紫外检测器 流动相：A：乙腈 B：磷酸盐缓冲溶液(称取磷酸二氢钾2.5g+磷酸氢二钾 2.5g，加水溶解定容到1000mL) 洗脱方式：等度洗脱A：B=10：90 流速：1.0 mL/min 检测波长：230nm 进样体积：20 pL 七、实验结果 1、25 mg/kg牛奶中苯甲酸的添加回收结果 表1牛奶中苯甲酸25 mg/kg添加回收结果 名称 回收率(%) 平均回收率(%) RSD(%) 1 2 3 苯甲酸 97.58 97.88 100.44 98.63 1.59 2、添加水平为25 mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图 图1添加水平为25 mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图 本号：MAX-www.biocomma.cn 牛奶中苯甲酸检测的固相萃取方法（Copure TM   MAX）一、实验目的本研究利用固相萃取法作为样品的前处理方法，HPLC法作为分析方法，检测食品中苯甲酸含量。该方法可简化样品的前处理过程，节省有机溶剂的使用，操作简便。二、实验目标物苯甲酸 (CAS:65-85-0) 。三、应用范围本方法适用于食品中苯甲酸的检测的HPLC检测及确证。四、参考标准《GB/T 23495-2009 食品中苯甲酸、山梨酸和糖精钠的测定 高效液相色谱法》。五、实验材料Biocomma  Copure    MAX 固相萃取柱60mg/3mL(Cat. No. COMAX360)。六、实验步骤1、样品提取准确称取牛奶10 g于50 mL离心管中，加入0.25 mol/L的亚铁氰化钾溶液2 mL，摇匀，再加入1 mol/L的乙酸锌溶液2 mL，摇匀，4000 r/min离心10 min。上清液待净化。2、SPE柱净化(1) 活化：MAX 固相萃取柱使用前用3 mL甲醇、3 mL水活化。(2) 上样和洗脱：在MAX固相萃取柱上加入5 mL备用样液，弃去流出液。用3 mL 2%氨水水溶液（v/v）、3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液；抽干小柱；用2 mL 5%甲酸甲醇溶液（v/v）洗脱，收集洗脱液（整个上样、洗脱过程保持流速1 mL/min）。(3) 重新溶解：洗脱液过0.45 μm滤膜，上机测试。3、HPLC条件设   备：Waters Alliance 2690色谱柱 ：Welch Ultimate XB-C18 (4.6×250 mm,  5μm)检测器 ：Waters 2487 紫外检测器流动相 ：A：乙腈B：磷酸盐缓冲溶液（称取磷酸二氢钾      2.5g+磷酸氢二钾2.5g，加水溶解定容到1000mL）洗脱方式：等度洗脱A:B=10:90流速：1.0 mL/min检测波长：230 nm进样体积:  20 μL七、实验结果1、25 mg/kg牛奶中苯甲酸的添加回收结果表1  牛奶中苯甲酸25  mg/kg添加回收结果2、添加水平为25 mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图图1  添加水平为25  mg/kg牛奶中苯甲酸检测的液相色谱图