Muse智能触控细胞分析仪在细胞毒性试验中的应用

Muse TM 智能触控细胞分析仪在细胞毒性试验中的应用 一、MuseTM 智能触控细胞分析仪简介 MuseTM 智能触控细胞分析仪是一款基于微毛细管细胞分析技术的细胞状态分析的智能化操作的仪器，通过优化的软件检测模块，配合相关的试剂盒可以实现快速完成各种细胞状态分析，如细胞毒性试验、细胞凋亡检测、细胞周期、细胞线粒体膜电位、细胞信号通路、细胞免疫分型等功能。 1. 微毛细管细胞分析技术 (Micro-Capillary) 这是90年代发展起来的一种利用微毛细管原理对细胞等生物粒子的理化及生物学特性（细胞大小、DNA/RNA含量、细胞表面抗原表达等）进行定量、快速、客观多参数相关检测分析的新技术。它借鉴了荧光显微镜技术与血球计数原理，同时利用荧光染料、激光技术、单抗技术以及计算机技术的发展,大大提高了检测速度与统计精确性,而且从同一个细胞中可以同时测得多种参数，为生物医学与临床检验学发展提供了一个全新的视角和强有力的手段。Micro-capillary在生命科学中的应用，标志着细胞生物学、肿瘤学、免疫学等进入了细胞和分子水平的研究。为从微观认识细胞及横向比较特征提供了精密、准确的方法和仪器。 2.仪器工作流程以及基本原理 （1）工作流程： 触屏选择模块→样本上机→触屏设定参数→正式读数→微毛细管液流系统→激光系统激发细胞荧光→信号处理系统→放大系统→计算机系统→数据分析 （2）基本原理： 采用的微毛细管的原理，待测标本制备成单细胞悬液通过荧光染色后进入微毛细管的流动室，由于微毛细管的虹吸作用样品流中细胞排成单列逐个经过激光聚焦区。如果我们将细胞中感兴趣的部分特异性的标上荧光染料，那么这些染料将在细胞通过激光检测区时受激光发出特定波长的荧光，通过一定波长选择通透性的滤色片，我们可将不同波长的散射光、荧光信号区分开来，并送到不同的检测器中，经过一系列的信号转换、放大，数字化处理，我们就可以在计算机直观的统计染上各种荧光染料的细胞各自的百分率。 二、细胞毒性检测方法概述 化妆品、食品添加剂、药物等投入使用前，都需要进行大量的细胞毒性试验，证明它们没有毒性，对人体无害，才能正式销售。而且在这些产品的销售过程中也必须要有相关部门的监管，也需要对其定期进行监测，其中的检测项目就是细胞毒性试验。目前分析细胞毒性和细胞活性的方法有很多种，比较经典的方法有台盼蓝染料法、MTT法、中性红染色法等。对细胞毒性的评估主要围绕两个方面的检测：死细胞多少以及活细胞多少。 死活细胞细胞膜存在通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择性膜，对细胞起保护和屏障作用，只允许物质选择性的通过；而细胞死亡之后，细胞膜受损，通透性增加，所以台盼蓝可以穿膜与解体的DNA结合显色，而活细胞拒染。该方法操作简单，但是在实际实验中，凋亡的细胞也会存在拒染的情况，如果待测细胞群自身凋亡比例较高，则活细胞比例将不准确。 与鉴定死细胞的台盼蓝法相反，MTT法和中性红染色法是对活细胞进行检测。中性红为活性染料，其进入细胞膜要求获取储存于活细胞溶酶体的能量而激活，如果细胞膜被任何物质损坏，则其不能被胞吞而储存于细胞内，细胞受损越严重，中性红摄取率更低。而MTT能被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原为非水溶性的蓝紫色结晶甲臜（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。但是这两个方法都需要长时间的染料孵育过程以及复杂的操作过程，而且容易受到其他因素的影响，造成结果的不准确。所以研究人员正在不断寻找新的实验方法，希望能获得更简单、更快捷、更准确的方法。 三、MuseTM智能触控细胞分析仪基于微毛细管技术的细胞毒性检测 1. MuseTM的细胞毒性实验方案 MuseTM的细胞毒性检测方案，采用的是基于流式原理的检测方式，区别于传统的细胞毒性检测方法。该方案由ViaCount试剂盒与MuseTM智能触控细胞分析仪的细胞毒性分析软件模块共同实现。ViaCount是一种双荧光符合染料，分别是细胞核染料和细胞活力染料。细胞核染料是具有膜透性的细胞核染料，可以对所有细胞，包括活细胞和死细胞的染色体进行染色，区分细胞和细胞碎片。而细胞活力染料则是非透性染料，会进入细胞膜损伤的死细胞或处于凋亡状态的细胞内与核DNA进行结合显色，但由于死细胞和凋亡细胞的染色程度不同而分成两个细胞群，两者被区分。通过这两种染料的组合，可以区分活细胞、凋亡细胞、死细胞和细胞碎片。 2. 实验操作步骤 MuseTM ViaCount操作非常快捷，分为三个步骤，细胞样本和ViaCount试剂混合，孵育5分钟，上机选择固定的细胞毒性分析模块，完成简单的参数的设定后即可采集数据，仅需采集1000个细胞，即可获得准确的实验报告，检测时间少于2分钟。 四、MuseTM智能触控细胞分析仪应用于细胞毒性实验的优势 1. 检测数据更加和稳定准确 MuseTM采用已经优化的细胞毒性分析模块，各类参数已经预先设定，只需按照向导提示进行操作就可以完成操作，避免了传统流式细胞仪复杂的流式参数设定的烦恼，而且也减少了更多的人为软件设定带来实验误差。另外采用配套检测试剂盒，该试剂盒经过严格染料浓度比例的验证，不存在由于试剂浓度与样本浓度的摸索问题。细胞样本和试剂混合后仅需5分钟然后上机检测，简洁了样本处理过程，避免了过冗长样本处理步骤带来的实验误差。综上所述，MuseTM通过预设模块、优化的试剂盒以及更简洁的样本处理过程减低了实验误差，确保数据的稳定和准确。 2. 快速检测，节省时间 与MTT和中性红染色法几个小时的染色时间相比，MuseTM样本与试剂的孵育时间仅需5分钟。从样本制备到上机检测获取数据，只需简单的三个步骤，操作简便，即使不精通传统流式细胞仪的技术人员也可以直接操作。 每个样本的检测时间不超过2分钟。 3. 节省检测样本 传统的流式细胞仪一般需要105以上细胞才可进行细胞计数和细胞分析，十分浪费细胞。MuseTM智能触控细胞分析仪采用微毛细管技术，对细胞量要求低，1000个细胞以上即可进行，有利于节省珍贵的样本。 4. 真正的绝对计数 MuseTM智能触控细胞分析仪采用微毛细管技术，真正实现了绝对计数功能，细胞计数时可明显区分活细胞，凋亡细胞，死细胞，并获得三种的在样本的浓度值，实现了真正“活细胞”计数，且无需依赖专用微球。 5. 仪器维护方便 传统的流式细胞仪配备了大型鞘液桶和废液桶，开关机清洗液非常麻烦。但是MuseTM智能触控细胞分析仪软件内置了清洗程序，按软件向导提示操作，需1种清洗液即可在10分钟内完成仪器清洗，而且也没有传统流式细胞仪那样定期更换滤芯和管路的烦恼。 6. 体积小巧可灵活移动 MuseTM智能触控细胞分析仪体积远远小于传统的流式细胞仪，而且光路固定化设计无需频繁校正，可搬动，永远出现在实验的最前线。 7. 具有其他更多的功能 MuseTM智能触控细胞分析仪软件模块除了完成细胞毒性分析的实验，还可以进行细胞凋亡，细胞周期，细胞线粒体膜电位、细胞信号通路、免疫分型等多种实验，是一台全功能细胞状态分析仪器。