粮食及加工品中添加及非法添加检测方案

实际样品分析及加标样品色谱图 目的 利用液相色谱仪，建立面粉中的偶氮甲酰胺的液相色谱检测方法。 引言 偶氮甲酰胺 (Azodicarbonamide，，7下称ADA)(分子结构式见图1)作为食品添加剂在面粉及其制品中广泛使用，其主要目的是用来增加面筋，改善面团流变学特性和机械加工性能、借以增加面粉质量。目前， ADA 在美国等国广泛应用，但在欧盟从90年代起就禁止使用，原因是 ADA 在180℃~220℃温度下，半小时左右即可生成氨基脲，种与硝基呋喃类代谢产物一致的化合物。因此，美国食品药品监督管理局(FDA)规定小麦粉中的ADA最大使用量为 0.045 g/kg，我国规定的推荐使用量为 0.0l~0.02 g/kg。目前还没有一个完善的标准方法来检测它，因此，建立一种测定面粉中 ADA 含量的液相色谱方法，从源头控制ADA 加入量，这对加强卫生监督，保障人们的身体健康具有重要的现实意义。 图1.偶氮甲酰胺分子结构式 高效液相色谱仪(Thermo Scientific Dionex UltiMate DGP 3600 系列，包括在线脱气单元的双三元梯度泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器。超纯水机 (Thermo Scientific GenPure Pro UV-TOC， P/N：50131948) 试剂和标准工作溶液 甲醇(色谱纯， Fisher Chemical， P/N：A452-4) 乙乙(色谱纯，Fisher Chemical， P/N：A998-4) 偶氮甲酰胺标准品 (Dr. Ehrenstorfer GmBH， 99.5%) 标准品溶液制备 称取偶氮甲酰胺标准品0.1000g， 置100mL棕色容量瓶中，用N， N-二甲基甲酰胺(DMF)和二甲基亚砜(DMS) 以9：1的比例溶解，定容至刻度；再精密量取适量该标准储备液，用乙乙：甲醇(9：1)稀释配制成1.0、2.0、10.0、20.0、50.0 pg/mL的标准工作溶液。 样品溶液制备 取面粉样品约5.0g，精密称定，置于25mL比色管中，加入10 mL 90% DMF / DMS溶液，摇匀后于旋涡振荡器上旋涡萃取10 min， 然后移入15mL离心管中，4000 rpm 离心10 min，上清液经0.22 um 有机膜过滤后，备用。 流动相组成：乙乙：甲醇：20mM醋酸铵水溶液，梯度洗脱，0-7.5min， 乙腈：甲醇=95：5； 7.5-11.5min，乙腈：20mM 醋酸铵水溶液=80：20；11.5-15min，乙腈：甲醇=95：5。 流速：0.8mL/min 色谱条件 进样体积：10pL 分析柱：Syncronis Amino 5 pm， 4.6×250mm(P/N：97705-254630， S/N：10001059 ) 柱温：25℃ 紫外检测器：272nm 结果与讨论 标准品色谱图 图2.标准溶液谱图(5.0pg/mL) 从图2可以看出， ADA 保留时间为7.390min， 峰形较好。其他两个峰，保留时间5.45min、9.24min分别为 DMF 和DMS. 方法重现性 取浓度为10.0 pg/mL 的标准工作溶液重复进样5针，保留时间的 RSD 值为0.14%，色谱峰面积的 RSD 值为1.51%。 按照色谱条件对5个标准工作溶液进行测定，以峰面积(Y)与标准工作溶液浓度 (X) 进行线性回归分析，得出方程为：Y=0.0547X-0.0726，相关系数r 为0.995。取浓度为 1.0 pg/mL 的偶氮甲酰胺标准工作溶液溶液，进样分析，得出偶偶甲酰胺峰高值的信噪比( S/N )约为15，因此，本方法检出限(以S/N=3计)为 0.20 pg/mL。 图3.方法检出限测定色谱图(1.0ug/mL) 图4.面粉样品测定色谱图 图5.面粉样品及加标测定色谱图(上-加标样品；下-样品) 取市售的面粉样品，按照本方法进行测试，分析谱图见图4，计算结果为未检出。 取该样品进行加标回收试验(色谱图见图5)，通过加入量计算得出加标回收率为85.0%。 结论 本方法使用液相色谱紫外检测器分析，氨基柱分离，取得较好的分析结果。该方法操作简便易行，重现性与线性均 能达到要求，适用于该类样品的快速检测。 ( 参考文献 ) ( [1]陈颖，祁广建，王熠，等. HPLC 法测定面粉及其制品中偶 氮甲酰胺的含量[J].中国卫生检验杂志，2010，20(2)：274-276 ) ( [2]陈波，靳保辉，林燕奎.面粉中偶氮甲酰胺含量的高效 液相色谱法谙定[J].分析测试学报，2008，27(9)：1002-1004 ) ThermoFisherSCIENTIFIC SCIENTIFICAN_C_LC-