水产及制品中河豚毒素检测方案(柱后衍生装置)

天津市兰博实验仪器设备有限公司 Tian Lanbo Instrument Tianjin Co., Ltd 高效液相色谱-柱后衍生法测定河豚毒素 河豚毒素又称原豚素和东方豚毒素，是一种天然的神经毒素，性质稳定，毒性极强。河豚毒素现有的检测方法有生物测法、理化分析法和免疫化学 (​http:​/​​/​baike.sogou.com​/​lemma​/​ShowInnerLink.htm?lemmaId=748216&ss_c=ssc.citiao.link​)法、生物测定法、高效液相色谱 (​http:​/​​/​baike.sogou.com​/​lemma​/​ShowInnerLink.htm?lemmaId=160481&ss_c=ssc.citiao.link​)法、气质联用 (​http:​/​​/​baike.sogou.com​/​lemma​/​ShowInnerLink.htm?lemmaId=6789295&ss_c=ssc.citiao.link​)等方法。河豚毒素可与庚烷磺酸钠形成离子对，在高温和强碱条件下可形成具有荧光特性的物质。本文以此为依据，建立了高效液相色谱柱后衍生法测定河豚毒素。 1 材料和方法 1.1 试剂 河豚毒素标准品，购自河北省水产研究院；庚烷磺酸钠和乙腈为色谱纯，乙酸、磷酸铵为分析纯，水为屈臣氏蒸馏水。 1.2仪器 分析型高效液相色谱仪（HPLC），由AS3000自动进样器，Lablliance Series 高压泵，天津兰博第三代 PCR3柱后衍生装置，Varian 9075荧光检测器和Lablliance色谱工作站组成，配一支Kromasil C18色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um)；AXM-8 Temp.柱温箱 1.3色谱条件 色谱柱：Kromasil C18色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um)，天津兰博实验仪器有限公司； 流动相：10 mmol/L庚烷磺酸钠+60 mmol/L磷酸铵缓冲液（pH = 5.0）+ 2%乙腈； 流速：0.6 ml/min； 柱温：25℃； 进样量：10 ul； 衍生剂：4 mol/L氢氧化钠溶液； 流速：0.5 ml/min； 衍生温度：110℃； 检测波长：激发波长384 nm，发射波长505 nm。 1 试验结果 1.1 液相色谱图 河豚毒素标准品的色谱图如图1所示。 图1河豚毒素标准品的高效液相色谱图 2.2线性关系的考察 将河豚毒素配置成40 ug/mL的储备液，用0.1%乙酸稀释成0.5、1、2、8、20、40 ug/mL的标准系类浓度。 结果表明在0.5到40 ug/ml浓度范围内，以进样浓度为横坐标，出峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程Y=9.46×102X（进样量）-7.32×102，r=0.9996，河豚毒素有良好的线性关系。 2.3重现性考察 精密吸取浓度为0.5 ug/ml标准品溶液10 uL，进高效液相色谱仪测定，重复进样5次，记录峰面积，计算峰面积标准偏差，得河豚毒素的RSD=1.6%。 3结论 本方法具有方便、准确、灵敏度高、精密度好等优点，且线性范围宽, 重现性好，可以满足日常分析需要。 公司地址：天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层 电 话：022-2359 2982 传 真：022-2359 2987