天津市兰博实验仪器设备有限公司 Tian Lanbo Instrument Tianjin Co., Ltd 高效液相色谱-柱后衍生法测定河豚毒素 河豚毒素又称原豚素和东方豚毒素,是一种天然的神经毒素,性质稳定,毒性极强。河豚毒素现有的检测方法有生物测法、理化分析法和免疫化学 (http://baike.sogou.com/lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=748216&ss_c=ssc.citiao.link)法、生物测定法、高效液相色谱 (http://baike.sogou.com/lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=160481&ss_c=ssc.citiao.link)法、气质联用 (http://baike.sogou.com/lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=6789295&ss_c=ssc.citiao.link)等方法。河豚毒素可与庚烷磺酸钠形成离子对,在高温和强碱条件下可形成具有荧光特性的物质。本文以此为依据,建立了高效液相色谱柱后衍生法测定河豚毒素。 1 材料和方法 1.1 试剂 河豚毒素标准品,购自河北省水产研究院;庚烷磺酸钠和乙腈为色谱纯,乙酸、磷酸铵为分析纯,水为屈臣氏蒸馏水。 1.2仪器 分析型高效液相色谱仪(HPLC),由AS3000自动进样器,Lablliance Series 高压泵,天津兰博第三代 PCR3柱后衍生装置,Varian 9075荧光检测器和Lablliance色谱工作站组成,配一支Kromasil C18色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um);AXM-8 Temp.柱温箱 1.3色谱条件 色谱柱:Kromasil C18色谱柱(4.6 x 250 mm, 5 um),天津兰博实验仪器有限公司; 流动相:10 mmol/L庚烷磺酸钠+60 mmol/L磷酸铵缓冲液(pH = 5.0)+ 2%乙腈; 流速:0.6 ml/min; 柱温:25℃; 进样量:10 ul; 衍生剂:4 mol/L氢氧化钠溶液; 流速:0.5 ml/min; 衍生温度:110℃; 检测波长:激发波长384 nm,发射波长505 nm。 1 试验结果 1.1 液相色谱图 河豚毒素标准品的色谱图如图1所示。 图1河豚毒素标准品的高效液相色谱图 2.2线性关系的考察 将河豚毒素配置成40 ug/mL的储备液,用0.1%乙酸稀释成0.5、1、2、8、20、40 ug/mL的标准系类浓度。 结果表明在0.5到40 ug/ml浓度范围内,以进样浓度为横坐标,出峰面积为纵坐标绘制标准曲线,得到线性回归方程Y=9.46×102X(进样量)-7.32×102,r=0.9996,河豚毒素有良好的线性关系。 2.3重现性考察 精密吸取浓度为0.5 ug/ml标准品溶液10 uL,进高效液相色谱仪测定,重复进样5次,记录峰面积,计算峰面积标准偏差,得河豚毒素的RSD=1.6%。 3结论 本方法具有方便、准确、灵敏度高、精密度好等优点,且线性范围宽, 重现性好,可以满足日常分析需要。 公司地址:天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层 电 话:022-2359 2982 传 真:022-2359 2987