油茶果皮多酚中分离制备检测方案(制备液相色谱)

天津市兰博实验仪器设备有限公司Lanbo Instrument Tianjin Co.， Ltd 公司地址：天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层电传 话：022-23592982 半制备液相色谱法分离制备油茶果皮多酚 油茶与油棕、油橄榄和椰子并称为世界四大木本食用油料树种。我国油茶资源非常丰富，全国现约有400万 hm2的油茶林，年产油茶籽超过 60万t。茶油因其较高的营养价值逐渐被国际认可，有“东方橄榄油”之美称。油茶果皮是茶籽综合利用后数量较多的副产品，含有木质素、蛋白质、多缩戊糖、咖啡因、鞣质等成分。其中多酚具有抗氧化、延缓人体衰老、抑制高血压的发生等重要功能。 经乙醇提取得到多酚的粗提物，需要进一步步离纯化。目前，高效制备液相色谱法因其分辨率高、产品纯度高、产量高等特点，已成为分离与纯化技术的主要手段，尤其在天然产物活性成分的提取纯化研究方面应用广泛。天津兰博利用半制备高效液相色谱法分离纯化油茶果皮多酚，主要考察了流动相比例、流速、进样量等因素，并最终确定了半制备高效液相色谱法分离纯化油茶果皮多酚的制备条件。 实验仪器 恒温水浴振荡器 台式离心机 旋转蒸发仪 微型植物试样粉碎机 半制备液相色谱仪(兰博 PRE2000，二元梯度型) 制备柱为 Laballiance-C8(10 um， 10mm×250 mm) 分析柱为 SMT-C18(4.6mm×250 mm， 5um) 油茶果皮多酚的提取 取5g左右新鲜的油茶果皮，于40℃下烘48h，粉碎，过120目筛，按1：15的料液比加入50%的乙醇溶液，于50℃水浴中振荡提取40 min， 然后以4 000 r/min 的转速离心 10 min， 再用1：5的料液洗涤残渣，重复上述操作。合并提取液，于40℃下旋转蒸发浓缩至约40mL。然后经0.45um滤膜过滤。 半制备液相色谱条件 色谱柱为 Laballiance-C8 (10)um，10mm×250 mm) 流速为2.5 mL/min， 柱温25℃，紫外检测波长为280 nm， 进样量 0.4 mL。 梯度洗脱：流动相A为水：乙酸=100：1；流动相B为乙腈。 洗脱程序： o0~10 min， B为5%~10%； 10~15 minB 为10%~15%； 15~25 min， B 为15%~30%； 25~26 min， B为30%~5%； 26~35 min， B为5%。 分析液相色谱条件 色谱柱为 SMT-C18(4.6 mm ×250mm，5um) 流速为1 mL/min，柱温25℃，紫外检测波长280 nm， 进样量10 pL。 梯度洗脱：流动相A为水：乙酸=100：1；流动相B为甲醇：乙腈：乙酸=90：10：1。 洗脱程序：0min， B为15%；0~10 min， B为15%~25%； 10~15 min， B 为 25%~30%； 15~20 min， B 为 30%； 20~30 min， B为30%~40%； ( 公司地址：天津市华苑新技术产业园区榕苑路4号天发科技园7号楼1门2层8层 ) 电话：022-23592982 传 真：022-2359 2987 30~35 min， B为40%~100%； 35~40 min， B 为 100%； 40~45min， B 为15%。 半制备液相色谱图 结 论 实验中采用优化的半制备液相分离方法可以同时收集得到8种物质，其中活性较高的5种物质的保留时间分别为13.990、15.566、18.512、20.328、21.189 min。其单次制备量可分别达到16.68、14.16、19.62、21.22、19.18 mg/g，产率较高。 ( 真：0 2 2-2359 2 987 )