肉制品中农兽药残留检测方案

SPE应用56 5g样品中残留的孔雀石绿或结晶紫用硼氢化钾还原为相应代谢产物隐色孔雀石绿或隐色结晶紫，乙腈-乙酸铵混合液提取，二氯甲烷液液萃取，用2.5mL乙腈溶解浓缩后的残渣作待净化液 SPE 活化： CNWBOND 酸性氧化铝小柱(500mg/3mL，上层)和 CNWBONDPRS 小柱(500mg/3mL，下层)用小柱连接头装好，用5mL乙腈活化 上样： 2.5mL 待净化液以1滴/秒的流速过柱 淋洗： 2×2.5mL乙腈，弃去氧化铝小柱，低真空抽干 PRS小柱 v 洗脱： 3mL 乙腈：0.1NpH10 的乙酸铵溶液(1：1)洗脱(最 后用乙腈定容至3mL后 HPLC-FLD测定) 色谱方法 色谱柱： CNW Athena C18-wp， 5um， 4.6*250mm， MF1A27 流动相： 乙腈+0.125moL/L乙酸铵pH=4.5(80+20) 流速： 1.3mL/min 检测： 265nm 柱温： 35°C 分析物 样品前处理步骤： 样品提取： 称取5g试样，加入10mL 0.2M 乙酸铵缓冲液 pH5.2， 100pLβ-葡 萄糖苷酸酶，10mL乙醚，漩迷混合后 3000r/min 离心 5min。取 上清液，残渣重复提取2次，合并提取液并吹干后加入2mL 三氯 甲烷和5mL 1mol/L NaOH 溶液， 漩涡振荡2min 后以 2000r/min 离 心5min， 重复 NaOH溶液提取1次，合并上清液作为待净化液 SPE 活化： Poly-Sery MAX 小柱(订货号： SBEQ-CA3379)预 先用5mL甲醇， 5mL去离子水活化 上样： 待净化液以 2mL/min 的流速过柱 淋洗： 5mL 1mol/L NaOH 溶液， 5mL0.1mol/L NaOH甲 醇溶液：水(7：3)，低真空抽干 MAX 小柱 洗脱：5mL叔丁基甲醚：甲醇(9：1，含2%甲酸)溶液洗脱己烷雌酚、己烯雌酚、双烯雌酚(45℃下氮气吹干后用50%甲醇水溶液定容至1mL 后HPLC-MS测定) 图1.添加1ppb己烯雌酚、己烷雌酚、双烯雌酚的猪肉样品，内标物为己烯雌酚-D8HPLC-MS测定条件： 色谱柱： C18，50mmx4.6mm I.D.， 1.8pm 时间(min) 流动相 乙腈/(%) 水/(%) 0 5 95 371111.1 59999 5 9511 95 采用Poly-Sery MAXSPE小柱提取雌激素的回收率 序号 分析物 回收率(%) 1 己烯雌酚(Diethylstilbestrol) 104.0 2 己烷雌酚(Hexestrol) 97.8 3 双烯雌酚(Dienestrol) 91.4