胚胎显微操作-胚胎分割

胚胎显微操作-胚胎分割     (一)概况    胚胎分割是通过对胚胎进行显微操作，人工制造同卵双生或同卵多生的技术，它是扩大胚胎来源的一条重要途径，其理论依据是早期胚胎的每一个卵裂球都具有独立发育成个体的全能性。    本世纪三十年代，Pinrus等首次证明兔2细胞胚的单个卵裂球在体内可发育成体积较小的胚泡。之后，Tarkowski等人的实验胚胎学研究成果进一步证明了哺乳动物2细胞胚的每一个卵裂球都具有发育成正常胎儿的全能性。七十年代以来，随着胚胎培养和移植技术的发展和完善，哺乳动物胚胎分割取得了突破性进展。Mullen等于1970年二分2细胞期鼠胚，通过体外培养及移植等程序，获得了小鼠同卵双生后代。Willadsen于1979年通过分离早期胚胎的卵裂球，成功地获得了绵羊的同卵双生后代。国内张涌等通过分割小鼠、山羊早期胚胎，均获得了同卵双生后代。进一步研究表明，四分胚，八分胚也可以发育成新个体。窦忠英等将7日龄的牛胚胎一分为四，实现了同卵三生。值得说明的是，随着胚胎分割次数的增多，分割胚的发育能力明显降低，这可能与胞质的不断减少有关。     (二)分割方法     胚胎分割方法主要有显微操作仪分割和徒手分割两种。     1.显微操作仪分割    在操作仪操纵下，左侧用固定吸管固定胚胎，右侧将切割刀(针)的切割部位放在胚胎的正上方，并垂直施加压力，当触到平皿底时，稍加来回抽动，即可将胚胎的内细胞团从中央等分切开，也可只在透明带上作一个切口，切割并吸出半个胚胎。此法成功率高，但需要昂贵的仪器设备。     2．徒手分割    先用0.1～0.2％链霉蛋白酶软化透明带，在实体显微境下，用自制切割针直接等分切割胚胎，为防止切割时胚胎滚动，可将胚胎置于微滴中进行切割，分开后及时加入液体。本法简单易行，但需要有灵巧而熟练的操作技能。 无论那种方法，分割好的半胚应完全分离，可分别装入空透明带内，也可不装入透明带直接移植。分割桑椹胚无方向性，而囊胚则必须沿着等分内细胞团的方向分割胚胎。    目前，胚胎分割与胚胎冷冻这两项技术已紧密结合在一起、分割成的半胚在冷冻解冻后经移植，仍可发育成新个体，并可用来生产异龄同卵双生后代，在育种方面发挥作用。毫无疑问，胚胎分割和胚胎冷冻技术可为实施胚胎移植提供大量的胚胎，从而促进了胚胎移植技术的推广应用。