红心咸鸭蛋中苏丹红I号检测方案

用FL2200型高效液相色谱仪检测红心咸鸭蛋中的苏丹红I号 林直宏 孙剑 毛海军 刘辰 （杭州福立分析仪器有限公司） 摘要：本文介绍了采用福立分析仪器有限公司生产的FL2200型高效液相色谱仪，测定红心咸鸭蛋中的苏丹红I号的方法。样品中的苏丹红I号用乙腈提取出来后，采用C18柱，以乙腈—水为流动相，在波长为478nm的条件下进行分析测定。检测限为10μg/L，峰高的RSD为1.46%，峰面积的RSD为3.72%，回收率为92%。 关键词：苏丹红I号：高效液相色谱；红心咸鸭蛋 苏丹红I号（Sudan I,分子式：C16H12N2O），化学名为1-苯基偶氮-2-萘酚，是一种工业用油溶性偶氮染料，在工业应用中也被称为溶剂14或油溶黄R[1]。有关研究表明，苏丹红I号会导致鼠类患癌，它对人类肝细胞也显现出可能致癌的特性，欧盟禁止苏丹红I号作为色素添加剂在食品中使用，我国也作了相应的规定。2005年初国家质检总局发出通知，严堵苏丹红色素污染的食品进入我国。2005年2月29日,国家质检总局和国家标准委批准发布《食品中苏丹红染料的检测方法—高效液相色谱法》国家标准[2]。但未见用国产的高效液相色谱仪法测定红心咸鸭蛋中苏丹红I号的相关报道，本实验采用福立生产的高效液相色谱仪测定红心咸鸭蛋中的苏丹红I号，达到了国家检测标准的要求。 1 材料和方法 1.1 仪器与试剂 FL2200型高效液相色谱仪，FL2200紫外检测器，手动进样阀（7725i），Easy3000色谱工作站，超声波清洗器，蜗旋混合器，真空旋发仪，乙腈（HPLC级），超纯水。 1.2 材料 红心咸鸭蛋（市场随机采购） 1.3 实验方法 1.3.1 色谱条件 色谱柱为Venusil XBP-C18柱（5μm, 4.6mm ×250mm）;柱温为室温；流动相为乙腈—水（90：10，V/V），使用前需进行超声波脱气处理；流速为1.0ml/min；紫外检测器波长为478nm；进样量20μL。 1.3.2 计算[3] 样品中苏丹红色素含量按下式计算： Xi(μg／g)= （Ai×Csi×V）/（Asi×m） Asi一标样溶液中苏丹红1号的峰面积 Ai一样品溶液中苏丹红1号的峰面积 Csi一苏丹红1号标准溶液浓度， μg／mL V一最后试样溶液定容体积，mL m一试样的重量，g 1.3.3 苏丹红I号标准溶液的配定 a.准确称取0.01g苏丹红I标准品，稀释后用容量瓶定容，得浓度为1μg/ml的苏丹红I号标准溶液。 b.分别把上述（a）的苏丹红I号标准溶液，稀释成浓度为0.8μg/ml，0.3μg/ml，0.1μg/ml，0.05μg/ml，0.01μg/ml的苏丹红I标准溶液。 1.3.4 样品处理[4] a.称取5g蛋黄，置于250ml锥型瓶中，加50ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 b.称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加50ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 c.称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加标准苏丹红I(浓度为1μg/ml)溶液5ml,加45ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 d. 称取5g蛋白，置于250ml锥型瓶中，加标准苏丹红I(浓度为1μg/ml)溶液1ml,加45ml乙腈，充分搅拌均匀，在蜗旋混合器中充分混合3分钟，超声波震荡1小时，滤纸过滤，0.45μm的有机滤膜过滤后，定容50ml上机检测。 2 结果与分析 2.1线性关系 取苏丹红I号，配置成浓度为：1μg/ml，0.8μg/ml，0. 3μg/ml，0.1μg/ml，0.05μg/ml，0.01μg/ml溶液，依次进样检测，结果如下表 表1 苏丹红1号的浓度与峰面积的关系数据 浓度(μg/ml) 峰面积（uAU*s) 0.01 3965 0.05 7011 0.1 10231 0.3 30081 0.8 75032 1 96375 图1 浓度与峰面积的线性相关性 线性方程为：y=93070X+2059.5; R2=0.9992. 2.2 最低检测限 配置浓度为10μg/L的苏丹红I号标样进样，色谱图如下： 图2 苏丹红I（浓度为10μg/L）的最低检测限图谱 由图2可得知，苏丹红I号的最低检测限可达到10μg/L以下，符合国标法（GB/T 19681 2005）提出的最低检测限要求。 2.3 标准样品的相对标准偏差（RSD） 取浓度为0.1μg/ml的标样重复进样5次，峰高和峰面积数据如表 表2 重复进样的峰高和峰面积数据 序号 保留时间（min) 峰高（uAU) 峰面积 (u AU*s) 1 9.787 367 11199 2 9.741 352 10231 3 9.731 367 10598 4 9.772 372 11298 5 9.817 371 10656 分别计算峰高和峰面积的RSD，峰高的RSD为1.46%，峰面积的RSD为3.72%。 2.4 红心咸鸭蛋蛋白中的苏丹红I检测 2.4.1 苏丹红I号的标样图谱： 图3 苏丹红I（0.3μg/ml）的标准图谱 由图3清晰的发现，苏丹红I号在478nm处有强吸收峰。 2.4.2 把1.2.2 b处理后得到的样品上机检测，得到的图谱如下： 图4 蛋白中的苏丹红I图谱 由上图4可知，蛋白提取液的HPLC谱图未发现明显的吸收峰，说明蛋白样品中未检测出苏丹红I号，所以鸭蛋蛋白中可能不含苏丹红I号。 2.5 回收率的计算 浓度为1μg/ml标准苏丹红I号的图谱峰面积A0=96375。 取1.2.2 c 中的操作液进样，得峰面积A1=8816uAU*s；经计算，苏丹红I号在红心咸鸭蛋蛋白中的含量为1μg/g时，回收率已达到91.4%。 取1.2.2 d 中的操作液进样，得峰面积A2=1786uAU*s；经计算，苏丹红I号在红心咸鸭蛋蛋白中的含量为0.2μg/g时，回收率已达到92.7%。 2.6 红心咸鸭蛋蛋黄中的苏丹红I检测 2.6.1 苏丹红I号的标样图谱： 图3 苏丹红I（0.3μg/ml）的标准图谱 由图3清晰的发现，苏丹红I号在478nm处有强吸收峰。 2.6.2 把1.2.2 a处理后得到的样品上机检测，得到的图谱如下： 图4 蛋黄中的苏丹红图谱 由上图3得，蛋黄提取液在478nm处，在相同的保留时间下有强吸收峰，在蛋黄提取液中加入少量的苏丹红I号标样，得到一个增大的峰型，所以蛋黄中可能含有苏丹红I号。 浓度为0.3μg/ml的苏丹红标准样品的图谱峰面积为30081； 蛋黄中的苏丹红I图谱的峰面积为38993； 经计算： 整个鸭蛋蛋黄中的苏丹红I号的量为61.67μg； 占总鸭蛋蛋黄的量为3.8μg/g； 占总鸭蛋的量为1.00μg/g。 3 结论 本方法以HPLC为基础，能较准确的检验出鸭蛋中的苏丹红I号的含量，检测限为10μg/L，峰高的RSD为1.46%，峰面积的RSD为3.72%，回收率为92%。色谱峰分离效果好，回收率较好，具有良好的稳定性和重复性，步骤简单，操作方便。 参考文献： [1].王吉，刘广文，张宏伟。苏丹红I号及其检测方法。药品卫生，研究报告。2005，第5期 [2].全国标准化委员会．GB／T19681—2005食品中苏丹红染料的检测方法．北京：中国标准出版社。2005 [3].李军，雍伟，李刚，杨强，储晓刚，唐英章。HPLC法测定辣椒及其制品中的苏丹红色素含量，检疫检测科学，2005年第2期10月2日。 [4].李月琪，姚建国，端裕树，高效液相色谱测定食品中的苏丹红，中国国境卫生检疫杂志，第29卷第2期，2006年4月。