由于用高效液相色谱检测尼古丁的方法具有灵敏度高.重现性好.且仪器易普及的特点。适用于实验室推广使用。因为本方法不仅可以监测环境空气中尼古丁的浓度。还可以测定人体生物样品如尿液、唾液和头发中的尼古丁含量.从而可以比较准确地评价人群的暴露水平。为制订科学的控烟措施及评价控烟效果提供技术支持。
环境空气中尼古丁的高效液相色谱测定方法 摘要:目的建立高效液相色谱(HPLc)测定环境空气中尼古丁的方法。方法样品通过反相C18柱(150×4.6mm)分离,采用磷酸二氢钾~乙腈溶液为流动相(流速为lml/min,采用等度洗脱),通过紫外检测器检测(波长为260nm)。结果该方法标准曲线的相关系数为0.99993,工作曲线的相关系数为0.9995,检出限为4.03×10-3ug/ml,测定下限为3.12×10-2ug/ml,对低、中、高3浓度尼古丁加标回收率为87.4%、88.5%、90.8%,对低、中、高3浓度尼古丁测定的相对标准偏差分别为0.88%、0.52%、1.1%,对低、中、高3浓度尼古丁的解吸率测定分别为92.3%、94.3%、94.6%,以及采样器中样品稳定性实验,表明11d内样品均稳定。 结论:该方法灵敏度高,重现性好,操作简便,仪器易普及。 关键词:高效液相色谱:环境卒气中尼古丁;检测 目前.国内外尼古丁的测定方法有很多种,例如可以采用LC—MS、LC—MS—MS、GC—MS的方法.但由于这些方法中仪器较昂贵,仪器保有量很低,无法在基层单位推广。由于用高效液相色谱检测尼古丁的方法具有灵敏度高.重现性好.且仪器易普及的特点。适用于实验室推广使用。因为本方法不仅可以监测环境空气中尼古丁的浓度。还可以测定人体生物样品如尿液、唾液和头发中的尼古丁含量.从而可以比较准确地评价人群的暴露水平。为制订科学的控烟措施及评价控烟效果提供技术支持。 材料与方法 1方法原理 环境中气态尼古丁采用被动式采样器采样.采样后将4%NaHS04-5%甘油溶液浸渍的玻璃纤维滤膜经氢氧化钠洗脱和正庚烷萃取.在萃取液中加盐酸混匀,用氮吹仪吹至近干,用流动相定容。使用C18反相色谱柱分离.紫外检测器检测,检测波长为260nm,以保留时间定性,以峰面积定量。 2实验仪器、材料和试剂 2.1实验仪器和材料 LC7000高效液相色谱仪。快速混匀器,超声波清洗器、氮吹仪,玻璃纤维滤膜(d=42mm),被动式采样壳体(由中疾控提供),10ul和50ul微型注射器,1.5ml样品瓶 2.3实验试剂 尼古丁(标准品),磷酸二氢钾(分析纯),磷酸(分析纯),盐酸(分析纯),乙腈(色谱纯),庚烷磺酸钠(色谱纯),正庚烷(色谱纯),甘油(分析纯),氢氧化钠(分析纯)。 3样品采集 3.1尼古丁吸收液的配置 准确称量20.09g NaH-S04和25.0g甘油,用纯水定容于500ml,配制成4%NaHS04-5%甘油的尼古丁吸收液。 3.2滤膜制备选择合格滤膜. 对光检查无针孔或折缝;将玻璃纤维滤膜在马弗炉中450℃烘烤2h.放入干燥器中冷却至室温:从干燥器中取出玻璃纤维滤膜。用尼古丁吸收液浸渍0.5h后.取出置于干燥器中晾干备用。 3.3采样器安装 被动式采样器由壳体、挡风层和吸收层组成。壳体包括前盖、压环、托板和底座,挡风层为核孑L滤膜和涤纶纱网.吸收层为浸渍尼古丁吸收液的玻璃纤维滤膜。安装好采样器后,放入铝箔袋中。封口。 4实验分析步骤 4.1流动相的制备 准确称取1.09g磷酸二氢钾,用超纯水溶解至接近于lL,用磷酸调节pH值为3,定容至lL,准确加入0.0082g庚烷磺酸钠,混匀,通过0.45um过滤膜过滤,制得的磷酸二氢钾溶液与乙腈比例为9:l混匀。 4.2色谱条件 色谱柱C18柱150mm×4.6mm 5um .柱温为25℃,SPD检测器,检测波长为260nm.流动相流速为1ml/min。 4.3标准溶液制备 准确称取10.1mg(99%的尼古丁)于10ml容量瓶中,加入流动相定容,超声3min。配成1.0ug/ul的尼古丁(1)液,取(1)液1ml于10ml容量瓶中,用流动相定容,得0.1ug/ul的尼古丁(2)液。 4.4尼古丁标准曲线的制备 分别移取尼古丁(2)液5ul、10ul准确加入1ml流动相,混匀,得0.5ug/ml、lug/ml。又分别移取尼古丁(1)液2u1、4ul、8ul、16ul准确加入1ml流动相,混匀,得2ug/ml、4ug/ml、8ug/ml、16ug/ml标准系列,得到尼古丁的标准系列分别进样5ul进行分析,各点进样3次,各点对应峰面积取平均值.以标准系列质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标.绘制峰面积和浓度的标准曲线。 4.5尼古丁工作曲线的制备 分别移取尼古丁(2)液5ul、10ul,移取尼古丁(1)液2ul、4ul、8ul、16ul置于制备好的玻璃纤维滤膜上,分别放于10ml比色管中.各加入5.0m1 1.5mol/L的Na0H和准确加入2.0ml正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min,取出于漩涡混匀器上.混匀3min.取正庚烷层(1.8ml),加l0“l盐酸,65℃超声混匀3 min,漩涡2min,氮吹近干,用lml流动相定容.65℃水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁。分别进样5ul进行分析.各点进样3次,各点对应峰面积取平均值。以标准系列质量浓度为横坐标.峰面积为纵坐标,绘制峰面积和浓度的工作曲线。 4.6样品处理 将样品取回后.取出内装的玻璃纤维滤膜,置于10.0ml比色管中.各加入5ml 1.5mol/LNa0H和准确加入2.0ml正庚烷充分混匀后在恒温65℃超声30min.取出于漩涡混匀器上,混匀3min,取正庚烷层(1.8ml),加lOul盐酸65cc超声混匀3min,漩涡2min,氮吹近干。用1ml流动相定容。65℃水浴超声3min漩涡2min彻底解析出尼古丁.进样5ul测定,根据尼古丁工作曲线的回归方程计算膜上的尼古丁含量。采样放置某办公室4d,取回采样器测定样品结果。 结果 l尼古丁标准曲线 做得的曲线线性方程为y=0.0001932x—O.03952,线性相关系数r=0.99993。 2尼古丁工作曲线 做得的曲线线性方程为y=16.36×10-4x-0.1492,线性相关系数r=0.9995 PAGE - 1 -
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