乳制品中三聚氰胺检测方案(气质联用仪)

，22-Sep-2008+13：35：561： Scan El+500ppb ，22-Sep-2008+13：35：56500ppb PerkinElmerwww.perkinelmer.com.cn 用 GCMS 同时分析奶制品中三聚氰胺及其三种常见类似物 自三鹿奶粉污染事件发生以来，奶制品中三聚氰胺的分析方法已经公布了许多。但目前国内普遍采用的方法都专注于三聚氰胺单一化合物的分析。而根据2007年春季美国宠物食品检出三聚氰胺的研究结果，科学家们相信除了三聚氰胺以外，其类似物――三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺及三聚氰酸的存在，都有会导致宠物及人体生病，为完成对含蛋白质原材料及产品的调查，需要测定包括三聚氰胺及其类似物的所有可以提高原料中含氮量的化合物。实验证明，在某些乳酸类样品中，没有检出三聚氰胺，但有可能检出其类似物。 本文参考 FDA 方法用甲醇的水溶剂提取试样中的三聚氰酸，， 三聚氰酸一酰胺，三聚氰酸二酰胺，和三聚氰胺，经过冷冻离心，过滤后用氮气浓缩并吹干，经双三甲基硅三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，用气相色谱质谱联用仪进行定性和内标法定量分析。同时测定三聚氰胺及其同系物，用质谱全扫描时，方法检出限为 2mg/kg， 回收率在70%~120%。如果单独使用 SIM 方式检测，则检出限可以达到 0.05mg/kg， 但由于样品基质的干扰，有存在假阳性的可能。美国FDA提供的方法，使用相同样品前处理过程，其提供的 GCMS 检出限是10mg/kg。本方法对 FDA 方法的进一步改进是加入内标2，6-二氨基-4-氯嘧啶(DACP)，监控衍生反应过程，保证不会因为衍生反应不完全而造成数据的不准确。 如果完全参照国标方法， NY/T 12372-2007标准，试样中的三聚氰胺用溶剂提取，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，用 N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，单测三聚氰胺，用选择离子扫描时，方法检出限为 0.02mg/kg。 For the Better 1.实验部分 1.1仪器型号 气相色谱质谱联用仪： Clarus 600GCMS (美国PerkinElmer) 色谱柱： Elite-5MS 30m*0.25mm*0.25um 1.2试剂 衍生化试剂：含有1%三甲基氯硅烷的双三甲基硅三氟乙酰胺(BSTFA)溶液 内标物：2，6-二氨基-4-氯嘧啶(DACP) 目标物：三聚氰酸，三聚氰酸一酰胺，三聚氰酸二酰胺，三聚氰胺 1.3实验步骤 1.3.1提取 准确称取0.5g样品，精确至0.01g，于离心管加入甲醇水溶液，漩涡震荡混匀，超声提取，静置，冷冻离心，用0.45um滤膜过滤，滤液取200ul用氮气吹干，待用。 1.3.2衍生化 吹干后残渣加吡啶，衍生化试剂，内标工作液混匀，反应30min。 1.3.3分析 取衍生化所得样品和标准工作溶液，置于自动进样器小瓶中，进行 GCMS分析测定。 2.数据结果分析 2.1标准工作曲线 分别取四种标准品适量用甲醇水溶解稀释成浓度为 0.05ug/ml、0.1ug/ml、0.2ug/ml、0.5ug/ml、1.0ug/ml、2.0ug/ml 的标准工作液，吹干后与样品同步衍生，上气相色谱质谱联用仪测定，标准品衍生物总离子流图见图1，质谱图见图2~6。 图120ppb标准品 TIC图 STD0922-3 1613 (8.533) Cm (1612：1613-(1601：1610+1615：1626)) 图2三聚氰酸衍生物质谱图 图3三聚氰酸一酰胺衍生物质谱图 图4内标物 DACP衍生物质谱图 49 596979 89 99109119129139149 159169179189199 209219 229239 249259269279289299309319329339349359 369 图5三聚氰酸二酰胺衍生物质谱图 ，22-Sep-2008+13：35：56 3.30e6 图6三聚氰胺衍生物质谱图 用相对校正因子进行线性回归得回归方程，以三聚氰胺为例，线性方程为：Y=(1.6349)X+(0.00651029) R=0.997628，样品在0.05~2.0ug/ml 范围间，呈现良好的线性关系，见图7。 图7三聚氰胺内标法标准曲线 2.2回收率实验 试验中同时测定试剂空白和方法过程空白，整个系统及分析操作没有带入系统干扰， 见图 8. 图8方法过程空白无干扰 分别对客户五个实际奶粉样品加标测定，计算加标回收率为70%~120%，见表1。 表1实际阴性样品加标回收率 Compound 1：Cyanuric acid Name RT Response ppm recovery Sample Text sa01spike 8.523 13.803 35.48 71% nai fen 50ppm in sample sa02spike 8.521 18.543 47.66 95% ye tai nai 50ppm in sample sa03spike 8.523 20.527 52.76 106% yuan nai 50ppm in sample sa04spike 8.523 13.703 35.22 70% nai lao 50ppm in sample sa05spike 8.521 18.541 47.65 95% xue gao 50ppm in sample Compound 2：Ammelide sa01spike 9.709 12.445 33.38 67% nai fen 50ppm in sample sa02spike 9.709 18.266 49 98% ye tai nai 50ppm in sample sa03spike 9.709 16.259 43.61 87% yuan nai 50ppm in sample sa04spike 9.709 14.174 38.02 76% nai lao 50ppm in sample sa05spike 9.709 14.407 38.65 77% xue gao 50ppm in sample Compound 3：melamine sa01spike 11.377 21.864 59.91 120% nai fen 50ppm in sample sa02spike 11.385 18.711 51.27 103% ye tai nai 50ppm in sample sa03spike 11.369 22.662 62.09 124% yuan nai 50ppm in sample sa04spike 11.384 21.244 58.21 116% nai lao 50ppm in sample sa05spike 11.392 22.754 62.35 125% xue gao 50ppm in sample 取 1ppm 和2ppm样品测定五次，考察其重现性，见表2。 表2三聚氰胺重现性 Sample Name RT Response ppm RSD% D8115-11 10.961 8.943 1.03 1.08% D8115-12 10.963 8.806 1.01 D8115-13 10.968 8.778 1.01 D8115-14 10.966 8.666 1.00 D8115-15 10.964 8.775 1.01 D8115-21 10.968 17.030 1.98 0.28% D8115-22 10.966 17.015 1.98 D8115-23 10.968 16.947 1.97 D8115-24 10.974 16.908 1.97 D8115-25 10.973 17.022 1.98 2.4实际样品中的三聚氰胺类似物 由于三聚氰胺在强酸或强碱性条件下易水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸。在实际酸性口味奶制品中没有检测到三聚氰胺，但的确曾测出三聚氰酸一酰胺，见图8。 图8实际酸奶样品中测出三聚氰酸一酰胺 2.5按照国标方法测定三聚氰胺 参考国标方法NY/T 12372-2007标准，试样中的三聚氰胺用溶剂提取，经混合型阳离子交换固相萃取柱净化后，用N，O-双三甲基硅基三氟乙酰胺(BSTFA)衍生化，单测三聚氰胺，用选择离子扫描时， 0.02mg/kg的样品图谱，见图9. 图9 0.02mg/kg 的样品 SIR图谱 3.结论 该方法完全符合美国 FDA 有关快速消费品中筛查三聚氰胺及其类似物的方法要求。经过对样品前处理过程的优化，适合于液体奶、奶粉、乳酪、雪糕及各种奶制品中三聚氰胺及其类似物的同时分析。 加上采用内标相对校正因子定量，使得分析结果更加准确，能有效的监控奶制品受三聚氰胺及其类似物的污染情况。 珀金埃尔默仪器(上海)有限公司 地址：上海张江高科技园区李冰路67弄4号楼电话：021-38769510传真：021-50791316电子邮件地址： CustomerCareCN@perkinelmer.com 要获取全球办事处的完整列表，请访问www.perkinelmer.com.cn/lasoffices ◎2008 PerkinElmer， Inc. 保留所有权利。珀金埃尔默徽标和外观设计是珀金埃尔默有限公司的注册商标。TurboMatrix 是珀金埃尔默有限公司及其子公司在美国或其国国家和地区的商标， Clarus 和PerkinElmer是珀金埃尔默有限公司及其子公司在美国或其它国家和地区的注册商标。文中提及的其它非珀金埃尔默有限公司及其子公司所有的其它商标均为其各自所有者的财产。珀金埃尔默保留随时更改此文档的权利，恕不另行通知。对于编辑、图片或排版错误概不承担任何责任。 文章介绍采用Clarus 600GCMS同时分析奶制品中三聚氰胺及其三种常见类似物，结果：该方法完全符合美国FDA 有关快速消费品中筛查三聚氰胺及其类似物的方法要求，分析结果更加准确，能有效的监控奶制品受三聚氰胺及其类似物的污染情况。