奶粉中胆碱检测方案

纳诺仪器nano instrumentShanghai Nano Instrument Co.，Ltd. 纳诺仪器nano instrument445中国卫生检验杂志2008年3月第18卷第3期Chinese Joumal of Health Laboratory Technology，Mar 2008； Vol 18No 3 在线渗析-离子色谱法直接测定奶粉中胆碱 黄丽，刘京平”，容晓文文 (1.广东省东莞市疾病预防控制中心，广东东莞 523016；2.瑞士万通中国有限公司，广州 510070) [摘要1 目的：建立在线渗析-离子色谱直接进样测定奶粉中胆碱的方法。方法：奶粉溶解后，直接在线渗析-离子色谱测定。结果：渗析效率99.0%~102.1%。胆碱的含量0.165%，加标回收率103.4%。相对标准偏差1.6%(n=6)。结论：该方法准确、快速、简便、重现性好、自动化高。 [关键词] 在线渗-离子色谱法；奶粉；阴离子 [中图分类号]O657.7*5 [文献标识码] A [文章编号] 1004 -8685(2008)03-0444-03 D irect determ ination of choline in m ilk powder for infant and young children by onlinedalysis- ion chrom ography Huang Lt， Liu Jing ping， Rong Xiaowen (1.Dongguan Center for Disease Control and Prevention，Dongguan 523016，China； 2.Metrohm China L td.， Guangzhou 510070，China) [Abstractl Objective： The method for detemm ination of the choline in m ilk powder by online dialysis ion chromatography is es-tablished.M ethods：M ilk powder was dissolved in pure water， and then directly detem ined by online dialysis- C. Results： Thedialysis recovery was 99.0%~102.1%. The content of choline in milk power was 0.165% and the recovery rate was 103.4%.The RSD of each anion was 1.6% (n=6). Conclusion： This method is accurate， quick， simple， rep roducible and highly auto-matic. 胆碱具有高稳定性，在食品贮藏、处理、加工和制备过程中，胆碱无显著损失。胆碱以游离态并以一些细胞成分包括卵磷脂(胆碱最主要的膳食来源)、鞘磷脂和乙酰胆碱的组分存在于所有活体中。虽然人体和哺乳动物具有合成胆碱的功能，但大量证据表明人体也需要膳食胆碱。胆碱以氯化物或酒石酸氨盐的形式用于婴儿配方食品的强化。氯化胆碱(cho-line chboride)的化学名称为2-羟基乙基三甲基胺盐酸盐，是动物生长过程中不可缺少的一种水溶性维生素，对人体新陈代谢起重要作用。胆碱是生物体内不可缺少的基本组分之一，通常被认为是B族维生素类的一种(也称为维生素B4)，是目前世界公认的14种维生素品种之一。它在生物体内具有不可替代的基本功能，主要体现在：细胞膜的组成成分之一；促进脂肪的分解(避免脂肪肝)；传递神经信号。试验证明在婴幼儿时期摄入适量的胆碱能够帮助提升宝宝的记忆能力11.2]。婴幼儿奶粉中胆碱测定的方法有 HPLC3和比色法4]这些方法的样品前处理复杂、时间长。本文采用万通的在线渗析技术，样品处理简单，试验效果好，奶粉样品的回收率103.4%。该方法准确、快速、简便、重现性好、自动化高，是产品检测和质量控制的有效手段。 ( [作者简介] 黄丽(1967-)，女，大学本科，主任技师，主要从事 理化检验工作。 ) 1材料与方法 1.1 仪器 761 Compact C(瑞士Metrohm公司)，838型自动进样器，833型泵单元，Metrosep C2-100阳离子交换柱。 1.22色谱条件 淋洗液：4.0mmol/L酒石酸+0.75 mmol/L吡啶二羧酸+2%丙酮；进样量20pl淋洗液流速 1.0ml/min。 1.3 试剂 酒石酸、吡啶二羧酸、丙酮均为分析纯试剂；氯化胆碱：分析纯；实验用水电阻为18.2MQ. 1.4 标准溶液和样品预处理 氯化胆碱的标准储备液(1000 mg/L)：准确称取 0.1000g氯化胆碱，加纯水溶解、定容至100ml分别取 0.5、1、2、3ml氯化胆碱的标准储备液稀释定容到100ml，配成5、10、20、30mg/L的系列标准溶液。 准确称取约0.500g奶粉样品于100ml容量瓶中，加入60ml去离子水，超声震荡溶解10min 后用去离子水定容到100ml，备用。 2 结果与讨论 2.1 渗析后样品转移时间的优化 渗析后需要用蠕动泵将在线制备的样品从渗析池转移至定量环。最佳样品转移时间会受到蠕动泵流速以及渗析池至 定量环间距离的影响。先固定渗析时间12min，改变不同的转移时间测定峰面积。峰面积和转移时间的试验结果如图1.从图1中可知，在本实验条件下最佳转移时间为 0.45min。 图1 峰面积和转移时间的关系 2.2渗析时间优化 渗析时间越长，渗析液的浓度越接近渗析前原液的浓度，当时间超过一最佳值时，渗析液的浓度达到稳定值。固定转移时间为0.45 min，得到的峰面积和渗析时间的关系如图2.本试验选定的渗析时间为12min。 图2峰面积和渗析时间的关系 2.33渗析效率的评估 通过比较直接进样和渗析进样测定渗析效率，进行渗析效率的评估，以确定是否更换渗析膜，建议每分析约100次样品更换渗析膜。配制不同浓度的氯化胆碱溶液，比较直接进样和渗析进样的测定结果，评估渗析效率。实验结果见表1. 表1 渗析效率 测定结果(mg/L) 渗析效率(%) 直接进样 渗析-进样 9.362 9.266 99.0 17.898 18.280 102.1 2.4色谱条件的优化 用吡啶二羧酸和酒石酸作淋洗液时，氯化胆碱的峰形会有一定的拖尾。为了改善峰形和缩短保留时间，需在淋洗液中加入有机改进剂。本文选用丙酮作有机改进剂，在洗脱液中加入丙酮使其浓度分别达到1%、1.75%、2%，对氯化胆碱标准溶液进行分离效果试验。实验结果表明，在洗脱液中加入丙酮后峰形有改善，并且随着丙酮浓度的增加，氯化胆碱的保留时间前移，2%酒酮作为有机改进剂所得分离效果最佳。本文选用 4.0mmol/L酒石酸+0.75 mmol/L吡啶二羧酸+2%丙酮作淋洗液。实验结果见图3、图4、图5. 图3 不同浓度的丙酮下胆碱谱图 图4 洗脱液2%丙酮+0.75 mmol/L吡啶二羧酸+4 mmol/L 酒石酸 图5 0.75 mmol/L 吡啶二羧酸+4 mmol/L 酒石酸 2.5 标准曲线 以5、10、20、30 mg/L浓度的标准溶液渗析进样绘制标准曲线，线性相关系数 r=0.99936，RSD =2.99%。图6为胆碱的标准曲线。 图6胆碱渗析进样标准曲线 2.6精密度 取一份奶粉样品，重复测定6次，进行精密度试验。实验结果见表2. 表2精密度试验(n=6) 项目 测定值 平均值 RSD(%) 峰面积(uS/am*min) 19.864，19.570，19.906，19.236，19.368，19.179 19.521 1. 60 保留时间(min) 10.47，10.46，10.45，10.46，10.46，10.46 10.46 0.061 1.5 色谱条件 检测器：电子捕获；色谱柱：25 m ×0.32 mm PEG20M石英WCOT毛细管柱；柱温：100℃(10 min)，25℃/min升温到200℃(保持 5 min)，检测室温度：280℃，汽化室温度：240℃；载气：高纯氮，柱前压力100 Kpa，分流比 30：1；进样量：0.5~3ul。 2结果与讨论 2.1 出峰顺序与保留时间 硝基氯苯类化合物的出峰顺序和保留时间分别为间硝基氯苯 15.26min、对硝基氯苯 15.96min、邻硝基氯苯16.74 m in. 2.22尾吹流量的选择 试验不同流量下硝基氯苯峰高和流速的关系。尾吹流速在82ml/min时，峰高为最大值，在65~100 ml/min范围内峰高变化不大，实验的尾吹流量定为75ml/m in。 2.3 标准曲线线性范围和检出限 实验测定基氯苯类化合物的标准曲线线性范围在0.015~0.20pg/ml之间，间硝基氯苯平均相关系数(n=6)r=0.9993，检出限为 0.18pg/L；对硝基氯苯平均相关系数(n=6)r=0.9995，检出限为 0.18 pg/L；邻硝基氯苯平均相关系数(n=6)r=0.9990，检出限为 0.18pg/L。 2.4方法的精密度和回收率 向12支空白管中分别加入两组含量为5ug和1ug硝基 (上接第445页) 2.7 加标回收率 取两份奶粉样品，其中一份作为本底样品测定，另一份加入10mg/L氯化胆碱，做回收率试验。实验结果见表3。奶粉中胆碱含量以CHNCO计)0.165(%c(-C11=.041×00)104.13X00)。1000×500 139.63 表3 回收率试验 测定结果(mg/L) 加标量 (mg/L) 加标后测定(mg/L) 渗析效率(%) 11.041 10.0 21.380 103.4 2.8 胆碱标准溶液的分解试验 试验发现，胆碱标准溶液放置一段时间会分解成氨。胆碱保存于聚乙烯瓶比保存于玻璃瓶分解更快。图7为放置聚乙烯瓶3天后的对比，可以明显看出：氨增高，胆碱降低。图8为放置时间相同，玻璃瓶和聚乙烯瓶中胆碱的对比图，可以看到聚乙烯瓶中的胆碱的峰低于玻璃瓶中的胆碱峰。 图7 放置时间对比图 1.新鲜配置；2.放置3天 氯苯类的标准溶液(n=6)，按前述分析步骤操作，计算相对标准偏差和回收率，结果见表1. 表1 加标样品的测定结果 化合物 加5g的样品 加1g的样品 平均值1 标准偏差 回收率 平均值 标准偏差 回收率 (ug) (%) (%) (ug) (%) (%) 间硝基氯苯 4.84 4.2 93.4~105 0.91 6.0 87.4~96.2 对硝基氯苯 5.17 3.8 95.2~106 0.89 5.2 88.0~94.8 邻硝基氯苯 4.90 3.6 92.6~104 0.92 4.9 90.2~95.6 3 小结 此实验采用环己烷萃取水中硝基氯苯类化合物，经毛细管柱分离后，直接用气相色谱电子捕获检测器进行测定。实验方法操作简便快捷，灵敏度高，线性范围宽，精密度和准确度也较好。可分别对样品中硝基氯苯类化合物进行定性和定量分析。 ( [参考文献] ) ( [1]GB/T5750.8-2006.生活饮用水标准检验方法有机物指标[S]. ) ( [2] GB13194-91.水质硝基苯、硝基甲苯、硝基氯苯、二硝基甲苯的测 定[S]. ) ( (收稿日期：2007-12-17) ) 图8 玻璃瓶和聚乙烯瓶保存条件对比1.玻璃瓶；2.聚乙烯瓶 3 结论 通过试验可以得出，利用在线渗析-离子色谱法技术直接测奶粉中的胆碱，方法简单，回收率高，线性好，分析时间短，能满足质量监控的要求。 ( [参考文献] ) ( [1]牟世芬，刘克钠.离子色谱方法及应用[M].第2版.北京：化学 工业出版社，2005.254-255. ) ( [2]王璋，许时婴，江波，等译.食品化学[M].第3版.北京：中国轻 工业出版社，2003.506. ) ( [3]龚文杰，马建明，赵立达.高效液相色谱法测定奶粉中磷脂酰胆碱 含量研究[J].中国卫生检验杂志，2005，11(15)：1331-1332. ) ( [4] GB/T5413.20-1997.婴幼儿配方食品和乳粉胆碱的测定[S]. ) ( [5]黄丽，刘京平.在线渗析-离子色谱法测定牛乳中阴离子[J].中 国卫生检验杂志，2006，16(1)：37-38. ) @China Academic Journal Electronic Publishing House. 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