人参皂苷类中药如何检测？看这一篇就够了~

前言人参皂苷是一种固醇类化合物，属于三萜糖苷类化合物，具有抗氧化、抗炎、血管舒张、抗过敏、抗糖尿病等多种治疗作用。此外，人参皂苷还能有效改善传统化疗药物的疗效，防止对正常组织的损伤。由于人参皂苷在人参属产品中的重要性，其含量的检测成为了确保产品质量和安全性的关键步骤。药典中涉及到人参皂苷的检测主要有人参、红参、西洋参、三七等品种，其中样品中人参皂苷Rg1和Re的检测是困扰很多分析人员的难点问题。由于Rg1和Re容量因子比较接近，在色谱图上体现为两者的保留时间接近，分离度不够，分析人员需要花费大量的时间进行色谱柱筛选工作。为了解决这一问题，我们整理了2020版《中国药典》涉及到人参皂苷类检测的中药品种，并提出解决方案，解决人参皂苷类中药检测难点问题。筛选思路中国药典人参皂苷类实验，属于标准方法重现，对于人参皂苷Rg1和Re分离度不够的问题，我们更多是通过筛选色谱柱来解决。药典对于实验色谱柱描述是以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，即C18色谱柱，但是由于键合工艺、键合相支链基团、封尾基团、色谱柱规格等不同，常会导致保留行为差异。本文考察了色谱柱类型、柱长、流速对Rg1和Re分离度的影响，具体结果如下：1. 色谱柱类型对分离度影响首先查看Alphasil VC-C18上Rg1和Re出峰情况，发现Rg1先出峰。通过计算Rg1和Re的疏水性，发现其疏水性的大小与出峰顺序相悖，表明当前体系下出峰顺序不单单基于疏水作用力。查看Rg1和Re结构式可知，两者都含有糖单元，保留强弱是糖单元的数量带来的亲水作用力差异引起。通过比较Alphasil VC-C18和Alphasil VC-C18AQ的分离结果，我们发现Alphasil VC-C18AQ整体保留时间会更长，这是因为该色谱柱键合相是十八烷基硅烷内嵌酰胺基，而酰胺基是亲水基团，会进一步提高色谱柱与Rg1和Re间的作用力。2.  柱长对分离度影响本文对色谱柱长度进行了考察，结果发现了一个有趣的现象，150mm色谱柱Rg1和Re分离效果优于250mm的色谱柱，如图2所示。这个结果与我们过往经验相悖，即相同条件下，色谱柱越长，化合物分离度应该越好。针对上述现象，我们进行了探究。众所周知色谱分离过程是化合物进入色谱柱后在固定相和流动相之间进行分配，多个组分实现分离就是借助不同化合物K'差异。在梯度洗脱过程中，K'不是恒定值，会随流动相的变化而改变，所以梯度洗脱中常用K'的平均值作为梯度的容量因子。式中Vm为色谱柱体积，F为流速，tG/ ΔΦ与梯度相关，S与化合物有关，已知小分子样品的S值大约为4。因此，当在给定的梯度条件下，化合物的容量因子只与流速F和色谱柱体积Vm有关。色谱分析中我们习惯根据K'改变后，化合物间相对保留行为是否改变将化合物分为“常规样品”和“非常规样品”。其中常规样品是K'改变后，相对保留行为不发生改变，非常规样品刚好相反。我们再回到这个实验，发现色谱柱长度从150mm变为250mm后，Rg1和Re分离度变差，说明Rg1和Re属于非常规样品范畴。为了验证这一结论，我们设计实验，改变流速F，考察K'减小后Rg1和Re分离度是否也会变差。结果如图3所示，我们发现1mL/min流速下分离度小于1.3mL/min，与色谱柱长度改变后得到的分离度变化趋势一致。实验结果为了便于大家对我们的方案有更多了解，在此列举四种人参皂苷类品种检测结果，其余品种详情结果可私信后台。人参西洋参人参总皂苷三七通舒胶囊（三七三醇皂苷）人参皂苷类品种及推荐色谱柱为了方便大家选择合适的色谱柱，我们将药典中人参皂苷的品种和对应的色谱柱汇总如下。