耐热大肠菌群系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌,在44.5℃培养24 h~48 h能发酵乳糖产酸并产气。该菌主要来自人和温血动物粪便,可作为粪便污染指标来评价牙膏的卫生质量, 推断牙膏中有否污染肠道致病菌的可能。本方法利用fluidot移液类产品达到快速检测出牙膏中耐热大肠菌群含量。
fluidot移液类产品在牙膏中耐热大肠菌群检验中的应用方案摘要:耐热大肠菌群系一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌,在44.5℃培养24 h~48 h能发酵乳糖产酸并产气。该菌主要来自人和温血动物粪便,可作为粪便污染指标来评价牙膏的卫生质量, 推断牙膏中有否污染肠道致病菌的可能。本方法利用fluidot移液类产品达到快速检测出牙膏中耐热大肠菌群含量。方案详情:1、 实验原理使用特定的培养基和试剂用于支持耐热大肠菌群的生长‌,通过培养基的培养和适当的温度条件下的孵育,观察是否有耐热大肠菌群生长‌。二、实验准备1、 仪器① 恒温水浴箱或隔水式恒温箱:44.5℃±0.5℃。② 温度计。③ 显微镜。④ 载玻片。⑤ 接种环fluidot FDT-D80001⑥ 电磁炉。⑦ 三角瓶:250 mL。⑧ 试管:18 mm×150 mm。⑨ 小倒管。⑩ pH计或pH试纸。⑪ 高压灭菌器。⑫ 无菌吸管:1 mL(具0.01 mL刻度)FDT-SP01001⑬无菌吸管:10 mL(具0.1 mL刻度)FDT-SP01010⑭手动移液器:fluidot 1 mL MSP1K与 10 mL MSP10K⑮电动移液器:pipetty 1 mL MSIC01-02-1000⑯吸头:1.5mL FDT-1500-1-TSF⑰灭菌平皿:fluidot FDT-9CM-2-S,直径90 mm。⑱蠕动泵分液器:fluidot 600D2、培养基和试剂① SCDLP液体培养基② 双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基 ③ 伊红美蓝(EMB)琼脂 ④ 蛋白胨水(靛基质试验用)⑤ 靛基质试剂⑥ 革兰氏染色液: 三、实验步骤① 取10 mL 1:10的检液,加到10 mL双倍乳糖胆盐(含中和剂)培养基中,置44.5℃±0.5℃培养箱中培养24 h±2 h,如既不产酸也不产气,继续培养至48 h±2 h,如仍既不产酸也不产气,则报告为耐热大肠菌群阴性。② 如产酸产气,划线接种到伊红美蓝琼脂平板上,置36℃±1℃培养18 h~24 h。同时取该培养液1~2滴接种到蛋白胨水中,置44.5℃±0.5℃培养24 h±2 h。 经培养后,在上述平板上观察有无典型菌落生长。耐热大肠菌群在伊红美蓝琼脂培养基上的典型菌落呈深紫黑色,圆形,边缘整齐,表面光滑湿润,常具有金属光泽。也有的呈紫黑色,不带或略带金属光泽;或粉紫色、中心较深的菌落,亦常为耐热大肠菌群,应注意挑选。③ 挑取上述可疑菌落,涂片作革兰氏染色镜检。④ 在蛋白胨水培养液中,加入靛基质试剂约0.5 mL,观察靛基质反应。阳性反应液面呈玫瑰红色;阴性反应液面呈试剂本色。⑤ 如选择生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统,可从营养琼脂平板上挑取经纯化的可疑菌落,用无菌稀释液制备成浊度适当的菌悬液,使用生化鉴定试剂盒或微生物鉴定系统进行鉴定。四、检验结果报告经上述检验步骤,若发酵乳糖产酸产气,平板上有典型菌落,并经证实为革兰氏阴性无芽胞短杆菌,靛基质试验阳性,则可报告被检样品中检出耐热大肠菌群。
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