用振动切片机切出高存活率的活体肺组织切片

实验一：切新鲜的小鼠肺实验样品：小鼠肺（无病变）所用设备：DTK-1000N振动切片机实验步骤1、活杀一只老鼠，解剖后露出完整肺部；2、从支气管处注入2%的生理盐水冲洗肺部，直到整个肺呈现出白色状态；3、从支气管处开始，取下整个肺，在支气管口处注入低温琼脂，直至充满全肺，再用生物线扎紧支气管，防止琼脂漏出（如图1）；*图1   充满琼脂的活体老鼠肺4、将肺放在4度冰箱里保存12小时；5、从冰箱取出肺，进行修块处理，修块的大小根据实验要求而定，一般为1 x 1cm左右；6、将修好的肺组织粘在切片机的样品盘中，设置切片机振动频率为55Hz，进刀速度为20 mm/min，依次切出200μm和300μm的切片（如图2和图3）*图2   200μm老鼠肺切片 *图3   300μm老鼠肺切片实验结果：切片非常完整，肺泡、纤维等组织完整呈现出来，没有裂纹，活性保存很好。 实验二：切纤维化的人肺1、实验样品：纤维化的人肺（换肺病人的局部组织）2、所用设备：DTK-1000N振动切片机实验步骤1、取样，取样时需要避开严重纤维化的肺组织；2、样品取出后浸泡在培养液（主要成分为氨基酸）中；3、取出样品置于包埋管中，在包埋管里注入低温琼脂，然后将包埋管放在冰浴中，使琼脂快速凝固（如图4）； *图4   充满琼脂的活体肺4、修块，去掉多余的琼脂；5、将修好的肺组织粘在切片机的样品盘中，设置切片机振动频率为50，进刀速度为20mm/min，依次切出200μm和300μm的切片（如图5和图6）*图5   200μm肺切片*图6   300μm肺切片实验结果：切片非常完整，肺泡、纤维等组织完整呈现出来，没有裂纹，活性保存很好。总结：老鼠肺可以被完整取下，所以可以采用从支气管处注入琼脂的方式来固定，这种固定方式的好处是不会阻断空气中的氧气进入肺循环，从而极大的增加了肺细胞的活性。而对于人体肺，取样时不能取出整个肺，无法采用往肺内灌注琼脂的固定方式，只能采用包埋管包埋的外部固定。这要求实验员非常快速的完成整个实验操作过程，否则，如果让肺泡和氧气阻断时间久了，肺细胞将会失去活性。另外，选择性能优良的振动切片机，切片时设置合适的振动频率和进刀速度，也是确保高活性切片的极为重要的因素。