【解决方案】软毛青霉酸的分析方案

软毛青霉酸的分析方案2024年4月，报道有消费者在服用含红曲保健品后死亡，该事件对社会影响甚大，调查发现问题成分可能为软毛青霉酸。软毛青霉酸是一种由青霉菌产生的毒素，青霉菌可产生多种抗生素，如青霉素、红霉素、链霉素等，拯救了亿万人的生命，而并非所有青霉菌都能救人，此次涉事的软毛青霉酸具有较大毒性，可侵害人体实质器官。红曲在发酵过程中可能产生黄曲霉素、桔青霉素，目前，各国设定了红曲中桔青霉素的限量标准，而对软毛青霉酸的研究较少，相关部门亟需制定新的检测标准，加强对红曲等发酵产品的监督，进一步保证食药安全。迪马科技使用色谱柱Diamonsil® C18(2), 250x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99603)，乙腈-1%三氟乙酸10:90作流动相，建立了软毛青霉酸的高效液相色谱分析方法。在该方法下，软毛青霉酸在0.001～0.2μg范围内具有良好的线性关系，定量限约为0.1μg/mL，检测限约为0.05μg/mL，可供广大客户参考。01HPLC法    01标准溶液配制(1) 取软毛青霉酸(0.1mg/瓶)1瓶，加入1mL甲醇配制成浓度0.1mg/mL的标准溶液。(2) 分别取软毛青霉酸标准溶液适量，用甲醇稀释配制成浓度分别为0.1μg/mL、0.2μg/mL、1μg/mL、2μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL的标准系列溶液。02色谱条件色谱柱：Diamonsil® C18(2)，4.6mmx250mm，5μm (Cat.#: 99603)流速：1.0mL/min进样量：10μL柱温：35℃检测波长：270nm流动相：乙腈:1%三氟乙酸=10:90仪器：岛津LC-2040C03 方法学考察结果3.1 检测波长的确定软毛青霉酸的紫外扫描图如下图所示。从图中可知，软毛青霉酸的最大吸收波长为270nm。3.2 线性关系分别进样7个梯度浓度的软毛青霉酸标准溶液，记录峰面积，以进样浓度( x,μg/mL )为横坐标，峰面积( y )为纵坐标，作标准曲线，并以最小二乘法计算得回归方程：Y=117555X-27508.4(R=0.9996)，结果显示软毛青霉酸在0.001～0.2μg范围内与峰面积呈良好的线性关系。3.3 检测限及定量限软毛青霉酸溶液在约10倍信噪比的浓度(S/N=10)即为定量限(LOQ)，LOQ约为0.1μg/mL；约3倍信噪比的浓度(S/N=3)即为检测限(LOD)，LOD约为0.05μg/mL。3.4 精密度取1μg/mL软毛青霉酸溶液连续进样6次，记录峰面积，峰面积RSD为0.18%，小于2%，表明仪器精密度良好。3.5 稳定性取2μg/mL软毛青霉酸溶液分别在0、24、28、40h进样，记录峰面积，峰面积RSD为0.64%，小于2%，表明标准品溶液在0~40h内能够保持稳定。04实验总结综上，得出软毛青霉酸测定方法学验证结果，如下表所示。02UPLC-MS法    01标准溶液配制标准储备液的配制：取适量标准品，用甲醇溶解并定容，配制成标准储备液，浓度为100μg/mL。标准上机溶液的配制：取适量标准储备液，用10%甲醇水逐级稀释，配置成浓度为0.1μg/mL标准上机溶液。02仪器条件(1)UPLC条件色谱柱：Diamonsil® Plus SCX，150x4.6mm, 5μm (Cat.#: 99420)流速：0.3mL/min进样量：10μL柱温：35℃流动相：A：水  B：乙腈梯度设置：(2)质谱条件电离模式：ESI扫描方式：负离子扫描检测方式：多反应监测电喷雾电压：-4500V雾化气压力：50psi辅助气压力：50psi气帘气压力：20psi离子源温度：500℃03 实验结果目标物峰面积和峰高汇总结果：