ELISA试剂盒显色淡、灵敏度偏低的原因及解决方法

　　Elisa 实验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。　　　　酶联免疫吸附实验显色淡，灵敏度偏低 可能原因及解决方法：　　　　1、试剂盒从2~8℃冰箱取出后打开盒盖，于室温平试剂盒未充分平衡衡至少20分钟，确保所有试剂已平衡至室温(约25℃)样品一般选择培养上清、血清、血浆。其他样品　　　　2、样品不适合做ELISA检测形式可能不适合做ELISA检测或者需要优化检测的条件(例如稀释液的成分)　　　　3、酶标板在贮存或洗后拍干时过分防止板过于干燥，干燥　　　　4、包被抗体遭到破坏 操作温和，移液枪不能碰到孔底　　　　5、样本和抗体孵育条件不合适，按照说明书条件，建议孵育过程中全程振荡孵育　　　　6、洗涤浸泡时间过长，按照说明书操作，勿人为增加漫泡时间　　　　7、偶联HRP试剂污染弃去试剂，重新配置　　　　8、错误的稀释偶联HRP试剂弃去试剂，重新配置确定合适的孵育时间:人为判定-最高浓度的标准TMB底物孵育时间过短，因非人。　　　　9、品出现深蓝色;S4-5有淡蓝色;机器判定620n为因素影响，需要优化孵育时间m波长下测定OD值达到0.6-0.65　　　　10、样本浓度过高或存在基质效应建议做不同稀释倍数，确认样本最佳稀释倍数酶标仪滤光片设置有问题或者波　　　　11、确认仪器设置及选择正确的波长检测长选择不对不能使用细胞培养板，建议使用ELISA专用高吸　　　　12、酶标板不适合做ELISA附力板子