培养基无法正常凝固原因

　　微生物培养基用来实验室培养细菌、真菌等微生物，通常有固体和液体两种类型。液体培养基又通常称为肉汤，而固体培养基通常称之为琼脂培养基，这是因为固体培养基当中通常添加了琼脂成分，起到凝固培养基的作用。　　　　琼脂：又叫琼胶，为无色、无固定形状的固体，溶于热水。琼脂最有用的特性是它的凝点和熔点之间的温度相差很大。它在水中需加热至95℃时才开始熔化，熔化后的溶液温度需降到40℃时才开始凝固。基于琼脂的这些特性，其在生物实验室中有着广泛的应用，例如制作微生物培养基的凝固剂，作为琼脂糖凝胶电泳时的电泳支持介质等等。　　　　但是配置培养基时，培养基通常会出现配置之后呈现流体，半流体不能凝固的状态，难以凝固，以下是一些常见的培养基无法正常凝固的原因。　　　　1.琼脂添加量较少　　　　自行配置培养基时，需要严格按照培养基配置的配方比例进行，固体培养基配置时通常保证每升添加12g以上的琼脂量。配置半固体培养基时，通常会减少琼脂额用量，所以如果琼脂用量少的话，会影响培养基的凝固，无法形成固体。　　　　2.使用劣质琼脂　　　　同上，因为琼脂是影响培养基凝固的关键，所以使用质量不好的、过期的、变质的琼脂，同样会影响培养基的凝固效果。　　　　3.pH值不准确　　　　这点是很多人配置培养基过程中会忽略的因素。配置的培养基最好保持在5-10的pH区间，pH过低时，会导致培养基酸化，影响琼脂的凝固效果。通常来说，按照正常流程进行配置都能保证pH在正常范围内，但是仍然有一些因素可能导致pH变化，值得注意。　　　　例如，使用的水pH过低，所以尽量使用桶装水较好。另外，灭菌前后去测量的话，也会发现培养基pH有降低的情况，这主要是因为在长时间的高温情况下，会导致培养基内营养物质分解，成分改变，从而影响pH；因此不同培养基因为成分有所差异，灭菌前后pH变化也并不一致，另外含有缓冲剂的培养基其pH变化会较小。因此通常建议配置培养基时，先把培养基pH值调到比原来略高0.4-0.5的值。　　　　4.培养基未完全溶解　　　　例如在配置时直接使用冷水进行溶解，琼脂只溶于热水而无法溶于冷水，使用冷水进行溶解不能使琼脂完全溶解和分散均匀。　　　　使用热水进行溶解，但也并未煮沸，一定要煮沸，保证完全溶解之后再去分装灭菌。灭菌结束之后倒平板的时候，也建议一定要先进行摇匀再倒板，否则可能会出现前面倒的板子凝固不好，而后面的板子才能凝固的情况。　　　　5.加热过度　　　　加热过度一般是指灭菌温度过高，或者时间过长，或者反复多次进行加热溶解。先前说过灭菌过后，培养基内成分会发生一些变化，特别是在过度的加热过后，可能会影响培养基的凝固，同时因为营养成分较大的变化，对实验结果也会产生影响，因此不建议反复过度的加热和灭菌。　　　　6.环境温度　　　　环境本身温度过高，例如在一些闷热的空间，或者较高温度的夏天时，培养基不能很好的凝固。因此建议可以适当的提高琼脂所使用的的比例，以更好地使培养基凝固。