组织固定固定液的选择标准

影响标本固定的因素很多，如组织与固定液的比例、固定时间、固定温度等；除此之外，固定液本身也很重要，若所选固定液不当，细胞内蛋白质、脂类、核 酸等成 分将会有不同程度地损失。固定剂最好随配随用，并注意其浓度和酸碱度。因此根据实际工作的目的，选用合适的固定液非常重要。下面是一些常用固定液的配制方 法及适用范围。1．单纯固定液(1)4％中性甲醛固定液：最常用的固定液，能满足常规HE及免疫组化、PCR等工作。一般无特殊要求的病理标本均适用。尤其值得注意的是，中性甲 醛是以 pH 7．2～7．4的磷酸缓冲液为溶剂配制的，其固定效果及对组织抗原性的保存均优于一般的4％甲醛固定液。此固定液配制后应密封并保存在阴凉处，保存时间不 超过一个月。甲醛(40%) 100 ml无水磷酸氢二钠 6.5 g磷酸二氢钠 4.0g蒸馏水 900 ml(2)乙醇固定液：使用时以80％～95％的浓度为宜，具有硬化、固定、脱水等作用，对组织渗透力较弱，因此很少单独使用，但其保存组织中的核酸强于中性甲醛，故常用于有核酸操作的实验或检查，如果用于证明尿酸结晶和保存糖原，可用100%乙醇固定组织。(3)4％的多聚甲醛：主要用于培养细胞的固定。2．混合固定液(1)乙醇一甲醛(乙醇－福尔马林，AF)固定液：适用于皮下组织中肥大细胞的固定。该固定液有固定兼脱水作用，固定后的标本可直接入95％乙醇脱水。甲醛(40％) 100 ml95％乙醇 900 ml(2)B5(醋酸钠一升gong一甲醛)固定液：多用于固定淋巴组织。染色前应进行脱gong沉淀处理。无水醋酸钠 1.25 g升gong 6.0 g蒸馏水 90 ml使用前加入甲醛 10 ml(3)Bouin固定液：特别适用于睾丸活检组织的固定。Bouin液对组织固定较均匀，收缩很少，不会使组织变硬变脆。需现配现用。饱和苦味酸水溶液(约1.22%) 75 ml甲醛 25 ml冰cu酸 5 ml(4)Carnoy固定液：穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，特别适合于固定外膜致密的组织，亦适用于糖原及尼氏小体的固定。无水乙醇 60 mllv仿 30 ml冰cu酸 10 ml(5)Zenker固定液：经此液固定的标本，细胞核和细胞质染色颇为清晰，但成本较昂贵且需特殊处理gong。该固定液要避免接触阳光，以免引起化学变化而失效。升gong 5.0 g重铬酸钾 2.5 g硫酸钠 1.0g蒸馏水(加至) 100 ml