细胞融合实验看这篇就够了

　　细胞融合(cell fusion)，细胞遗传学名词，是在自发或人工诱导下，两个细胞或原生质体融合形成一个杂种细胞。基本过程包括细胞融合形成异核体(heterokaryon)、异核体通过细胞有丝分裂进行核融合、最终形成单核的杂种细胞。细胞融合可作为一种实验方法被广泛适用于单克隆抗体的制备，膜蛋白的研究。　　细胞融合实验所需试剂：　　（1）胎牛血清或小牛血清　　（2）培养基：细胞融合常用的培养液有DMEM、RPMI 1640 及无血清培养基等。DMEM有高糖（4500mg／L）及低糖（1000mg／L）之分。杂交瘤细胞在上述几种培养基中均能良好的生长与增殖　　（3）HAT及HT培养液：HAT、HT以五十分之一的比例加入培养基（ DMEM或RPMI 1640）　　（４）聚乙二醇（PEG）溶液：称取一定量的PEG，高压蒸汽灭菌（8磅30分钟），待其冷至50℃左右，与等体积的RPMI1640混合，即为50%的PEG溶液，封口后4℃放置备用。用于细胞融合的PEG的分子量可在1000－6000之间，目前已有商品化的50%PEG溶液可直接用于细胞融合。　　细胞融合的方法：　　动物细胞杂交或细胞融合　　将两个不同种的亲本细胞A和B，以灭活的仙台病毒或聚乙二醇(PEG)为融合诱导剂，使A和B两细胞融合成为一个具两个遗传性不同核的异核体（如遗传性相同的核融合在一起叫同核体）。　　随后异核体经有丝分裂成为两个具有A和B两亲本的杂种融合核。AB杂种经多次分裂，B亲本的染色体会逐渐减少到一个或完全消失。　　PEG促进细胞融合注意事项：　　（1）事先做好两种原生质体融合的识别标记，如色素、缺陷型、抗性标记等。　　（2）原生质体或细胞密度应在105个/ml，两种原生质体或细胞按1：1等量混合　　（3）PEG诱导融合的效果，同分子量大小及浓度高低密切相关。分子量和浓度愈大，促进细胞融合的能力愈高，而其粘度及对细胞的毒性也随之增大，故通常以选用分子4000-6000浓度30-50%的PEG进行融合为宜。　　（4）PEG使细胞融合或致死剂量界限很狭小，为达到成功有效的融合，还必须严格掌握PEG的处理时间。一般加入PEG后，24℃培育10-20min（注意时间宜短不宜长，过长使原生质体周围包裹一层膜形成凝集体，降低融合率），缓缓加入高钙离子溶液15min后用冲洗液清洗，离心收集细胞或原生质体。