Copure® HLB 食品中香兰素、乙基香兰素的测定

Copure® HLB 食品中香兰素、乙基香兰素的测定GB 5009.284 -2021《食品安全国家标准 食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香豆素的测定》于2022.03.07正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2022年版）中同时进行了更新。本方法采用Copure® HLB SPE Cartridge柱，测试了婴儿营养米粉中的香兰素和乙基香兰素，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的SPE-HPLC-MS/MS方法，可供参考。1、 样本前处理1. 样品提取称取1.00 g 试样，加入10μL内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L），加入10mL水和480μL盐酸溶液，涡旋振荡l min，加入20mL乙睛，涡旋振荡1 min，超声提取30min后，加入5g氯化钠，涡旋振荡2 min。8000r/min离心5 min，取上清液至玻璃试管，待净化。2. 萃取、净化与浓缩（Copure® HLB，30mg/6mL）将得到的上清液于40℃氨吹至近干，加入1mL甲醇溶解残渣，用水定容至10mL，使该样液以小于1mL/min的流速通过固相萃取柱（使用前用 3 mL甲醇、3 mL水活化）。样液全部流出后，用5mL水淋洗，负压抽干，10 mL甲醇-水溶液（4+1）洗脱，负压抽干，收集洗脱液，40℃氨吹至近干，准确加入1 mL甲醇-水（4+1）溶液溶解残渣，过0.22um微孔滤膜后，待测。3. 标准曲线的制备精密量取混合标准工作液（香兰素及乙基香兰素均为10mg/L）、内标混合中间液（D3-香兰素及D5-乙基香兰素均为10mg/L）适量，用甲醇-水（4+1）溶液稀释成 20ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL的系列标准工作液，内标的浓度均为0.1mg/L，临用现配，上机测定。2、 仪器条件仪器设备：液相色谱串联质谱仪 (Aglient 1290-6470 LC-MS QQQ)色谱柱安捷伦ZORBAX Eclipse Plus C18，规格：2.1×100mm，1.8μm离子源AJS-ESI流速（mL/min）0.3柱温（℃）40进样体积（L）5流动相梯度：时间（min）A泵：0.5%甲酸溶液B泵：     乙腈      （%）0.0065355.0055455.0110908.0010908.01653512.006535质谱条件：检测方式：多反应离子监测 (MRM)干燥气温度（℃）250干燥气流量（L/min）7雾化器压力（psi）30鞘气温度（℃）325鞘气流量（L/min）11毛细管电压（V）正模式负模式35003000喷嘴电压（V）正模式负模式0500质谱参数组分名称母离子子离子驻留时间传输电压碰撞能量加速电压模式香兰素153.065.2*80111293正模式93.280111133正模式乙基香兰素167.1110.9*8011153正模式92.980111453正模式D3-香兰素156.265.080106553正模式D5-乙基香兰素172.093.180106213正模式注：*为定量离子。3、 实验结果    表 1 营养米粉中香兰素的加标回收实验结果检测项目加标水平（mg/kg）平均回收率（%）RSD（%）香兰素0.0592.21.91 0.590.90.42 2.091.80.28 表 2 营养米粉中乙基香兰素的加标回收实验结果检测项目加标水平（mg/kg）平均回收率（%）RSD（%）乙基香兰素0.0584.81.13 0.594.90.28 2.094.151.06 4、 订购信息货号描述包装COHLB360Copure® HLB固相萃取柱，30mg/6mL50支/盒  SDC-3000-Dbiocomma® 多管涡旋混匀仪1台/箱SF130-22-NL尼龙针式过滤器，直径13 mm，孔径0.22 μm，有机系100个/盒SC2-12 mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425100个/盒V2-AL2 mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32 mm，9-425100个/盒Copure®HLB 食品中香兰素、乙基香兰素的测定 GB5009.284 -2021《食品安全国家标准食品中香兰素、甲基香兰素、乙基香兰素和香 豆素的测定》于 2022.03.07正式实施，同时此方法在食品安全监督抽检实施细则（2022年 版）中同时进行了更新。 本方法采用 Copure®HLBSPECartridge 柱，测试了婴儿营养米粉中的香兰素和乙基香 兰素，建立了一份具有良好回收率及稳定性，能满足国标要求的 SPE-HPLC-MS/MS 方法，可供参考。 一、 样本前处理 1.样品提取 称取 1.00g 试样，加入 10μL 内标混合中间液（D3-香兰素及 D5-乙基香兰素均为 10mg/L ），加入 10mL 水和 480μL 盐酸溶液，涡旋振荡 l min ，加入 20mL 乙睛，涡旋振荡 1min ，超声 提取 30min 后，加入 5g 氯化钠，涡旋振荡 2min 。8000r/min 离心 5min ，取上清液至玻璃 试管，待净化。 2.萃取、净化与浓缩（Copure®HLB ，30mg/6mL ） 将得到的上清液于 40℃氨吹至近干，加入 1mL 甲醇溶解残渣，用水定容至 10mL ，使 该样液以小于 1mL/min 的流速通过固相萃取柱（使用前用 3mL 甲醇、3mL 水活化）。样 液全部流出后，用 5mL 水淋洗，负压抽干，10mL 甲醇 -水溶液（4+1）洗脱，负压抽干，收集洗脱液，40℃氨吹至近干，准确加入 1mL 甲醇 -水（4+1）溶液溶解残渣，过 0.22um 微 孔滤膜后，待测。 3.标准曲线的制备 精密量取混合标准工作液（香兰素及乙基香兰素均为 10mg/L ）、内标混合中间液（D3-香兰素及 D5-乙基香兰素均为 10mg/L ）适量，用甲醇 -水（4+1）溶液稀释成 20ng/mL 、50ng/mL 、100ng/mL 、200ng/mL 、500ng/mL 、1000ng/mL 的系列标准工作液，内标的浓度均为 0.1mg/L ，临用现配，上机测定。 二、 仪器条件 仪器设备：液相色谱串联质谱仪 (Aglient 1290-6470LC-MSQQQ) 色谱柱 安捷伦 ZORBAXEclipse PlusC18，规格：2.1×100mm，1.8μm 离子源 AJS-ESI 流速（mL/min） 0.3 柱温（℃） 40 进样体积（L） 5 流动相梯度： 时间（min） A泵：0.5%甲酸溶液 B泵： 乙腈 （%） 0.00 65 35 5.00 55 45 5.01 10 90 8.00 10 90 8.01 65 35 12.00 65 35 质谱条件： 检测方式：多反应离子监测 (MRM) 干燥气温度（℃） 250 干燥气流量（L/min） 7 雾化器压力（psi） 30 鞘气温度（℃） 325 鞘气流量（L/min） 11 毛细管电压（V） 正模式 负模式 3500 3000 喷嘴电压（V） 正模式 负模式 0 500 质谱参数 组分名称 母离子 子离子 驻留时间 传输电压 碰撞能量 加速电压 模式 香兰素 153.0 65.2* 80 111 29 3 正模式 93.2 80 111 13 3 正模式 乙基香兰素 167.1 110.9* 80 111 5 3 正模式 92.9 80 111 45 3 正模式 D3-香兰素 156.2 65.0 80 106 55 3 正模式 D5-乙基香兰素 172.0 93.1 80 106 21 3 正模式 注：*为定量离子。 三、 实验结果 表 1营养米粉中香兰素的加标回收实验结果 检测项目 加标水平（mg/kg） 平均回收率（%） RSD（%） 香兰素 0.05 92.2 1.91 0.5 90.9 0.42 2.0 91.8 0.28 表 2营养米粉中乙基香兰素的加标回收实验结果 检测项目 加标水平（mg/kg） 平均回收率（%） RSD（%） 乙基香兰素 0.05 84.8 1.13 0.5 94.9 0.28 2.0 94.15 1.06 图 1香兰素、乙基香兰素总离子流图 图 2香兰素、乙基香兰素内标标准溶液特征离子质量色谱图（0.1mg/L ） D3-XLS D5-YJXLS +MRM (172.0->93.1)S 172.0->93.1 图 3香兰素、乙基香兰素标准溶液特征离子质量色谱图 （1000ng/mL ） XLS 四、 订购信息 货号 描述 包装 COHLB360 Copure®HLB固相萃取柱，30mg/6mL 50支/盒 SDC-3000-D biocomma®多管涡旋混匀仪 1台/箱 SF130-22-NL 尼龙针式过滤器，直径13mm，孔径0.22μm，有机系 100个/盒 SC2-1 2mL蓝色聚丙烯盖，白色PTFE/红色硅胶垫，9-425 100个/盒 V2-AL 2mL螺纹棕色样品瓶，带书写处11.6*32mm，9-425 100个/盒