3D多孔可降解微载体助力病毒生产解决方案

近年来，溶瘤病毒、病毒载体和新型疫苗的研发项目越来越多，这些新兴的病毒类生物制品很多都依赖于贴壁细胞培养进行病毒生产。传统培养工艺下，贴壁细胞通常使用细胞培养瓶、滚瓶、或细胞工厂等进行培养，培养规模相对有限，培养过程难以控制，且难以在保障质量可控的前提下进行工艺放大。而使用微载体结合生物反应器进行贴壁细胞的悬浮式培养，是一种非常好的解决方案。2、 行业局限传统微载体• 多采用合成聚合物制备为刚性实心微球，贴壁细胞在微载体表面呈2D曲面生长。• 在高投料密度下，反应器搅拌容易造成细胞死亡、并产生微载体碎片，对病毒产量及后续纯化造成成本增加、安全风险、回收率低等不可忽略的影响。3、 华龛突破华龛生物面向病毒类生物制品行业推出首款3D多孔可降解微载体——3D TableTrix® 微载体V01，可用于培养病毒类生物制品生产用的多种贴壁细胞，与传统微载体相比，在细胞扩增和产毒方面优势明显。扫描电镜视野中可见多个均匀颗粒微载体绿色荧光亮点代表活细胞，图为Vero细胞在微载体上生长72小时的状态搭配3D FloTrix® 动态培养工艺及3D FloTrix® vivaSPIN自动化生物反应器，可轻松实现1×107/mL高密度的Vero细胞培养。4、 应用案例（一）Vero细胞Vero细胞是于1962年从非洲绿猴的肾脏中分离出来的异倍体贴壁依赖性细胞。1987年，世界卫生组织(WHO)正式批准传代细胞系作为生物制品生产的原料，从此Vero细胞逐渐被批准用于人用疫苗的生产，例如脊髓灰质炎灭活疫苗、口服脊髓灰质炎病毒疫苗和狂犬病毒疫苗等。自2020年初新型冠状病毒肺炎疫情爆发后，Vero细胞也被全球多家企业首选用于新冠疫苗的研发与生产。• Vero细胞贴壁能力较强，容易适应微载体培养工艺。使用华龛微载体培养Vero细胞可实现多级反应器连续放大传代培养，细胞密度峰值可达1×107/mL，容易达成工艺放大。• Vero细胞在华龛微载体（左）与传统球形微载体（右）上的生长情况对比，标尺为250μm。使用华龛微载体培养Vero细胞并生产病毒：病毒A的产毒滴度较传统2D工艺提高了近2个数量级；病毒B和病毒C的产毒效率亦显著高于传统球形微载体。（2） 人二倍体细胞人二倍体细胞是来源于正常人胎儿组织的原代间质类细胞。相较于动物细胞，人二倍体细胞无潜在致癌性、无动物源因子污染，是理想的生物制品原料细胞;但其细胞倍增时间长、传代次数非常有限，难以实现放大培养，也限制了实际应用。人二倍体细胞被广泛应用于甲型肝炎、水痘、脊髓灰质炎、狂犬病毒等灭活疫苗、以及风疹减毒活疫苗的生产；此外，还用于成纤维细胞干扰素等制品的生产。• 使用华龛微载体培养人二倍体细胞，收获时每克微载体可承载的细胞量是传统微载体的3~4倍，细胞密度可达2×106/mL。• 人二倍体细胞在华龛微载体（左）与传统球形微载体（右）上的生长情况对比，标尺为500μm。• 人二倍体细胞在华龛微载体上培养并收获病毒，病毒E的抗原含量可达到2D工艺的约3倍水平。（三）MDCK细胞（犬肾上皮细胞）MDCK细胞是于1958年从科克猎犬的肾脏中分离出来的贴壁依赖性上皮样细胞。美国FDA已于2012年批准Flucelvax®上市，这是美国市场中首个源于细胞培养技术的疫苗，取代了基于鸡胚的传统工艺，其采用的正是MDCK细胞。• 使用华龛微载体培养MDCK细胞可实现多级反应器连续放大传代培养，接毒前细胞密度峰值可达近1×107/mL。• MDCK在华龛微载体上所生产的病毒D，其血凝滴度高于传统球形微载体的近4倍。CytoNiche华|嘉|生细胞建筑师—高质量三维细胞制造专家北京华龛生物科技有限公司产品特性和参数PRODUCT FEATURES AND PARAMETERS为什么进行细胞规模化培养?WHY DO WE NEED LARGE-SCALE CELL CULTURE? CytoNiche华|燕|生细胞建筑师—高质量三维细胞制造专家北京华龛生物科技有限公司牙髓来源MSC(DPSC)连续扩增曲线ESC分化MSC扩增曲线 细胞建筑师——高质量三维细胞制造专家 ARCHITECT FOR CELLS：EXPERT IN 3D MANUFACTURING OF HIGH-QUALITY CELLS 3D TableTrix@微载体 3D TableTrix@ Microcarrier Series N Cyt N i 已获得FDA DMF及CDE药用辅料资质 美 国 FDA 药用辅科资质 (D M F #35481， 已激 活 ) C D E 药 用辅料 资质 (审 批登 记 号 ：F 20200000496；F 20210000003) 电话： 400-0126688 网 址 ： www.cytonich e .com 地 址 ：北 京市海 淀 区 益园 文创基地B 区 1号 楼208号 3D TableTrix "微 载体 3D TableTrix ° 微 载体 力 自 主 研 发 产 品，由数万 颗弹 性 三 维多 孔微载体组 成，孔 隙 率 >90%，粒径 大 小可控于 50-500u m 区间，均 一 度 ≤100u m，形成 真 正的3D万 生 培 养 。 电镜图视野 中可见多 个均 匀 颗 粒 绿色荧 光 亮卢 代 表 活 细 胞，UCMSC 在 微载体 上 生 长72小 时 的 状态 1.降低 因 批 次 不同产 生 的 细胞间 的质 量 差 异 2.避免 人工 培养过 程中 的 污 染 风 险 ·满足大规模需求 1.3D培养单次制 备 细胞数量 多 ，可 满 足 大 量 收获细胞 的 需 求 2.整个培养 过 程可做到自动化、规 模化、封闭式细胞制备 微 载体细胞培养 技 术的应用 领 域 APPLICATION FIELD OF MICROCARRIER CELL CULTURE TECHNOLOGY 四 可 培 养 细胞种类 CULTUREABLE CELL TYPES ●细胞药物研发 人 源 脐 带 MSC细 胞 扩 增 曲 线 人源 脐 带 MSC 连 续传代 接种时间(天) 多 次实验表 明 ，采用3D Table T ri x 微 载体结 合 3D F l oTr i x 动态培 养工 艺，脐 带 MSC的96h 扩 增倍 率 可 达 10-16倍 。 采 用3D T ableTrix 微 载体 结 合3D F l oT r ix 动态 培 养 工艺 ，将脐 带 MSC 连 续传代6次 ，96h扩 增倍率 仍 可 保持12-14倍。 鼻 腔黏膜干细胞 HUVEC 人脐静脉内皮细胞 HDF 人真皮成纤 维 细胞 3T 3 细胞系 神经 元 细胞 羊源脐带 MSC 牛源脐带MSC 脐 带MSC 连 续放大扩 增 曲 线 采 用3D T a bl e Tr ix微 载体 结合 3D F l oTrix 动态培 养 工 艺，牙髓来 源 MSC(DPSC)经一 次3D放 大 传 代 后 ，144h打 增 倍 率可 达180-200倍以 上 。 01.细胞流式 分 析 经 3D 微 载体培养 扩 增 所收获的MSC 各 项 表 面标 记 物指标均 合格 采用3D T ableTrix °微 载体 结 合 3D Fl o Tri x动 态 培养 工 艺，E SC 分化 MSC的144h打增侣 率可约达 40-50倍 。 02.三 向 分 化 经3D 微 载体 培养扩增的 MSC 具 备成 骨 、成 脂 、成 软 骨 的三系 分 化能力 03.细胞 安全性 检测 无菌检查 应符合规定 检定结果 细菌内毒素检查 <5EU/mL <0.25EU/mL(107细胞/mL) 支原体检查 阴性 阴性 巨细胞(CMV)病毒检查 阴性 阴性 EB病毒(EBV)检查 阴性 阴性 人类免疫缺陷病毒(HIV)检查 阴性 阴性 乙型肝炎病毒(HBV)检查 阴性 阴性 丙型肝炎病毒(HCV)检查 阴性 阴性 梅毒螺旋体抗体(TP)检查 阴性 阴性 Vero 细 胞 产 病毒B 使用华龛微载体培养Vero细胞可实现多级反应器 连 续放大传 代培 养 ，细 胞密度峰值 可达 1×107/mL 。 使 用华龛微载体培养Vero细胞并生产病毒：病毒A的产毒滴度较传统2D工艺提高了近2个数量级 ；病 毒B与病毒C的 产 毒效率均显著高 于 传统球形微载体。 02.人 二 倍 体 细 胞 人 二 倍体细胞 产病 毒 E 培养时间(天 ) 使用华龛微载体 培 养人 二 倍体细胞，收获时每克微载 体 可承载的细胞量是传统微载体的3-4倍 ，细 胞密度可达 2×106/mL。 使用华龛微载体培养MDCK细胞可实现 多级反 应 器连续放大传代培 养 ，接毒前细胞密度峰值可达近 1×107/mL。 华龛生物针对3D TableT r ix微载体开发的微教体裂解液(3D F lo T rix " D i gest微载体裂解液)，特异降解微载体材料，可 实现全部细 胞 的高效、温和收获，避免了 传 统胰酶消化液对 细胞的损 伤。通 过 常 规简 单 的 清洗 工艺 ，无任何有害物质残 留，可提 供 残留测试万法，符合细胞制剂终 产 品的质量标准 与 安 全 性要 求 。 微载体 降 解残 留 裂解 液 残留 多 次 实验表 明，遵 循细胞清 洗 SOP，终 产 品 中 的微载体降 解残留 实 测值低 于合 格标准的上 限 值 。*检测 万 法 与 标准 由 中检 院移验 。 多次实 验 表明 ，遵 循 细 胞清 洗SO P ，终 产品 中的 裂 解液 残 留 实 测 值 低于 合格 标准 的上 限 值。 杉心产品细胞微载体系列已获得美国F D A D MF药用辅料资质及两项 国 家药监局药用辅料资质，并通过中检院质 量 评价及 安全性评价的资质认证 。 江 苏 省 药物 安全性评 价 中 心出具 安全 性 评 价报 告 (微教 体细胞 毒 性、溶 血性、皮下 汪射 局邵 刺激性 、王动 全身 过 敏 性 、腹腔注射 给 药 毒 性 等 ) 型号 产品名称 规格 W01-200 3D TableTrix°微载片 W01 2g W01-1000 3D TableTrix*微载片 W01 10g W01-10000 3D TableTrix° 微载片 W01 100g W01-10-10g 3D TableTrix° 微载体(粉剂)W01 10g W01-100-10g 3D TableTrix* 微载体(粉剂)W01 100g W02-200 3D TableTrix*微载片 W02 2g W02-1000 3D TableTrix 微载片 W02 10g W02-10000 3D TableTrix 微载片 W02 100g R001-500 3D FloTrix Digest裂解液 0.5g R001-5000 3D FloTrix" Digest裂解液 2.5g R001-50000 3D FloTrix" Digest裂解液 25g V01-100-10g 3D TableTrix" 微载体V01(疫苗用) 100g V01-100g 3D TableTrix°微载体V01(疫苗用) 100g V01-300g 3D TableTrix" 微载体V01(疫苗用) 300g V01-500g 3D TableTrix" 微载体V01(疫苗用) 500g ARC H ITECT F OR CELLS： EXP E RT IN 3D M A N UF A C T URING OF H IGH -QU A L I TY CE LLS 细 胞 建筑 师——高 质 量 三 维细胞制造 专家 注：可满足大包装定制生 产 需求 一 小 90 OOOOG C ylo V ic h e