干细胞大规模培养制备整体解决方案

干细胞（Stem cells）是指一类具有高度自我更新与分化潜能的细胞群体，在特定诱导条件下，可分化成为各类功能细胞群，形成相应的组织或器官。干细胞可颠覆常规治疗手段，在治疗多种重大疾病方面有着极大潜能。利用干细胞移植，已经能够治疗多种常规医疗手段无法解决的重大疾病。近年来，干细胞产业化发展迅猛，受关注程度日益增加。目前国际上有超过13种干细胞产品上市，主要用于心血管疾病、自身免疫病、骨关节炎、复杂性肛瘘和移植物抗宿主病等疾病治疗。而我国尚无1种干细胞产品获批上市，因此，大力推进干细胞产业化，以满足临床转化和应用需求，对于抢抓新一轮生物医药领域产业变革和历史发展机遇，改变干细胞产业“跟跑”和被动局面，具有重大现实意义。但如何提高干细胞数量及质量，满足干细胞治疗产品临床应用的实际需求，是干细胞产业化所面临的巨大挑战。使用微载体结合生物反应器进行干细胞三维扩增培养，是一种理想的解决方案。2、 行业局限二维培养：• 人工成本高 • 传统胰酶消化损伤细胞 • 难以实现规模化、自动化 • 单批次收获108 • 批次间差异大对干细胞产业需求而言，细胞培养“质”不达标、“量”不充足。3、 华龛突破干细胞大规模培养制备整体解决方案华龛生物基于3D微载体，开发出的3D FloTrix® 贴壁细胞培养工艺，涉及接种、培养、扩增、收获、清洗、分装多个环节，实现了细胞药物、细胞衍生品、病毒以及蛋白的全封闭式规模化、智能化的生产制备。• 贴壁细胞的悬浮式培养3D TableTrix® 微载体为细胞提供贴壁位点，通过持续搅动使微载体保持均匀的悬浮状态，从而实现贴壁细胞的悬浮式培养• 核心技术自主攻坚研发核心产品3D FloTrix® 细胞扩增套装及3D FloTrix®生物反应器均为自主研发并获得国家专利认证• 显著提升产物制备效率较传统人工2D细胞培养可大幅降低生产成本4、 应用案例：(1) 人源脐带MSC• 人源脐带MSC细胞扩增曲线多次实验表明，采用3D TableTrix® 微载体结合3D FloTrix® 动态培养工艺，脐带MSC的96h扩增倍率可达10-16倍。• 人源脐带MSC连续传代采用3D TableTrix® 微载体结合3D FloTrix® 动态培养工艺，将脐带MSC连续传代6次，96h扩增倍率仍可保持12-14倍。• 脐带MSC连续放大扩增曲线采用3D TableTrix® 微载体结合3D FloTrix® 动态培养工艺，可实现脐带来源MSC的多级反应器连续放大培养，单个罐体单批次可生产【百亿量级】干细胞。(2) 牙髓来源MSC(DPSC)• 牙髓来源MSC(DPSC)连续扩增曲线采用3D TableTrix® 微载体结合3D FloTrix® 动态培养工艺，牙髓来源MSC（DPSC）经一次3D放大传代后，144h扩增倍率可达180-200倍以上。(3) ESC分化MSC• ESC分化MSC扩增曲线采用3D TableTrix® 微载体结合3D FloTrix® 动态培养工艺，ESC分化MSC的144h扩增倍率可约达40-50倍。5、 质检数据(1) 细胞流式分析经3D微载体培养扩增所收获的MSC各项表面标记物指标均合格(2) 三向分化经3D微载体培养扩增的MSC具备成骨、成脂、成软骨的三系分化能力(3) 细胞安全性检测经3D微载体培养扩增所收获的MSC，无内毒素、支原体、外源病毒引入(4) 微载体降解残留多次实验表明，遵循细胞清洗SOP，终产品中的微载体降解残留实测值低于合格标准的上限值。*检测方法与标准由中检院核验。多次实验表明，遵循细胞清洗SOP，终产品中的裂解液残留实测值低于合格标准的上限值。*检测方法与标准由中检院核验。6、 可培养细胞种类：CytoNiche华|龛|生|物 CytoNiche细胞建筑师一―高质量三维细胞制造专家华|嘉生物北京华鑫生物科技有限公司 细胞建筑师--高质量三维细胞制造专家 ARCHITECT FOR CELLS： EXPERT IN 3D MANUFACTURING OF HIGH-QUALITY CELLS 让细胞培养 变得更简单 一干细胞的前世今生 1908年“干细胞”概念被首次提出 1938年提出细胞核移植设想 1952年细胞核移植实验获得成功(美洲豹蛙胚胎)1963年科学家证明小鼠骨髓中存在"造血干细胞" 1968年同卵双胞胎以外的骨髓移植首次成功 1978年首次从脐血中分离造血干细胞 1981年“胚胎干细胞”被提出 1989年发现小鼠脑室下存在前体细胞或者干细胞 1992年小鼠中分离到神经干细胞 1995年恒河猴囊胚中分离到胚胎干细胞并成功构建胚胎干细胞 细胞系 1996年克隆羊"多利”诞生 2007年胚胎干细胞的研究获得2007年诺贝尔医学和生理学奖 2012年诱导多能干细胞的研究荣获2012年诺贝尔生理学或医学奖 2015年《国家重点研发计划干细胞与转化医学重点专项实施方案》(征求意见稿)发布，科技部启动国家重点研发计划“干细胞与转 化医学”重点专项试点工作 武汉睿健医药帕金森研发管线NouNeu001的IND申请作为国内首 家、国际上第二家在帕金森领域多能干细胞衍生药物临床申请获得 受理 2018年陕西佰傲再生以国际首创的干细胞合体技术实现全牙髓再生 2022年国际上首个异体脐带间充质干细胞治疗特发性肺纤维化的 一类新药注册临床研究在上海市第六人民医院启动 截至2023年2月28日，国内共有42家企业(不含子公司)的62款 干细胞药物临床试验申请(IND)获得受理，共有30家企业(不含 子公司)的47款获准默许进入临床试验(临床试验默示许可)。 近年来，干细胞产业化发展迅猛，受关注程度日益增加。目前国际上有超过13种干细胞产品上市，主要用于心血管疾病、 自身免疫病、骨关节炎、复杂性肛瘘和移植物抗宿主病等疾病治疗。而我国尚无1种干细胞产品获批上市，因此，大力 推进干细胞产业化，以满足临床转化和应用需求，对于抢抓新一轮生物医药领域产业变革和历史发展机遇，改变干细胞产 业“跟跑”和被动局面，具有重大现实意义。 干细胞产业化瓶颈-2D培养的「质」 「量」限制 如何提高干细胞数量及质量，满足干细胞治疗产品临床应用的实际需求是干细胞产业化所面临的巨大挑战。为应对这一挑战，干 细胞大规模培养制备工艺是目前主要的应对解决方案。 BE I J I N G 三干细胞大规模培养制备整体解决方案 华龛生物基于3D微载体，开发出的3D FloTrix®贴壁细胞培养工艺，涉及接种、培养、扩增、收获、清洗、分装多个环节，实现 了细胞药物、细胞衍生品、病毒以及蛋白的全封闭式规模化、智能化的生产制备。 贴壁细胞的悬浮式培养 3D TableTrix®微载体为细胞提供贴壁位点，通过持续搅动使微载体保持均匀的悬浮状态，从而实现贴壁细胞的悬浮式培养 核心产品 3D FloTrix®细胞扩增套装及 3D FloTrix®生物反应器均为自主研发并获得国家专利认证 核心技术自主攻坚研发 较传统人工 2D细胞培养可大幅降低生产成本 显著提升产物制备效率 1.应用案例 a、细胞流式分析 a、人源脐带MSC �� 经3D微载体培养扩增所收获的MSC各项表面标记物指标均合格 �� b、三向分化 �� � 经3D微载体培养扩增的MSC具备成骨、成脂、成软骨的三系分化能力 � c、细胞安全性检测 经3D微载体培养扩增所收获的MSC，无内毒素、支原体、外源病毒引入 多次实验表明，采用3D TableTrix®微载体结合3D FloTrix®动态培养工艺，脐带MSC的96h扩增倍率可达10-16倍。 采用3D TableTrix®微载体结合3D FloTrix®动态培养工艺，将脐带MSC连续传代6次，96h扩增倍率仍可保持12-14倍。 采用3D TableTrix®微载体结合3D FloTrix®动态培养工艺，可实现脐带来源MSC的多级反应器连续放大培养，单个罐体单批次可生产百亿量级干细胞。 b、牙髓来源MSC（DPSC） 牙髓来源MSC（DPSC）连续扩增曲线 采用3D TableTrix®微载体结合3D FloTrix®动态培养工 艺，牙髓来源MSC（DPSC）经一次3D放大传代后，144h扩增倍率可达180-200倍以上。 c、ESC分化MSC 采用3DTableTrix®微载体结合3DFloTrix®动态培养 工艺，ESC分化MSC的144h扩增倍率可约达40-50倍。 4.可培养细胞种类 d、微载体降解残留 人源脐带 MSC 人源胎盘MSC 人源脂肪 MSC 人源羊膜MSC 人源牙髓 MSC ESC分化MSC 人源骨髓 MSC iPSC分化 MSC 微载体降解残留 裂解液残留 猪肌肉干细胞 猪脂肪干细胞 hAEC 人源羊膜上皮干细胞 多次实验表明，遵循细胞清洗SOP， 终产品中的微载体降 解残留实测值低于合格标准的上限值。*检测方法与标准由中检院核验。 UPC 人肾脏成体干细胞 多次实验表明，遵循细胞清洗SOP，终产品中的裂解液 残留实测值低于合格标准的上限值。 鼻腔黏膜干细胞 *检测方法与标准由中检院核验。 羊源脐带 MSC 3.成本对比 牛源脐带 MSC 生产百亿(1×1010)细胞 单位：万元 注：2D采用10层细胞工厂培养，3D采用生物反应器(15L)培养 四全产品线